Методики криоконсервации

фото Методики криоконсервации
После разжижения при 37°С стерильный эякулят тщательно смешивают с равным объемом криопротекторной среды. Разведенную пробу в стерильных условиях переносят в пластмассовые пробирки объемом не более 300 мкл каждая, которые обеспечивают оптимальное распределение температуры при охлаждении. В специальном "криопланшете" может храниться максимум 12 пробирок. Морозильники с компьютерным программированием позволяют стандартизовать темпы замораживания.

Во избежание сморщивания клеток, осмотического их повреждения и образования ледяных кристаллов необходимо строго соблюдать соответствие темпов замораживания и оттаивания. Охлаждение обычно производят постепенно. Наружные кристаллы льда начинают образовываться вскоре после достижения 0°С (примерно при -5°С), а внутри клеток — при -15-80°С. Общих правил относительно скорости охлаждения от 0°С до -80°С не существует. Слишком быстрое охлаждение сопровождается сморщиванием клеток вследствие их дегидратации, а слишком медленное — образованием ледяных кристаллов. В большинстве случаев при криоконсервации спермы человека замораживание проб производят со скоростью от 8 до 21°С в мин.


По достижении -196°С пробы хранят в жидком азоте.

Скорость последующего оттаивания проб должна соответствовать скорости их замораживания. Мы пользуемся морозильником, в котором пробы охлаждаются до -196°С, а оттаивание происходит по обратной программе. В других лабораториях оттаивание производят при комнатной температуре или с помощью водяной бани, нагретой до 37°С. Мы рекомендует оттаивать небольшую аликвоту пробы, чтобы оценить подвижность сперматозоидов. Это может оказаться полезным при последующем использовании таких клеток для искусственного оплодотворения.

Сперматозоиды, полученные хирургическим путем (из придатка или самого яичка), помещают в специальную среду для дальнейшей обработки, смешивают с криопротекторами и, наконец, замораживают и хранят в жидком азоте. В разных лабораториях используют разные емкости для хранения. Пробы из придатков яичек обычно хранят в описанных выше пробирках, тогда как для проб из самих яичек используют меньшие емкости, подходящие для стерильной криоконсервации.


Оцените статью: (11 голосов)
3.91 5 11

Cтатьи из раздела Андрология:


Генетический риск при использовании криоконсервированных сперматозоидов
Искусственное оплодотворение криоконсервированными сперматозоидами
Криоконсервация образцов, полученных путем MESA и TESE
Криоконсервация перед вазэктомией и после вазовазостомии
Криоконсервация у больных с повреждениями спинного мозга
Криоконсервация яйцеклеток на стадии пронуклеусов
Онкологические заболевания у взрослых при криоконсервации сперматозоидов
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.