Соотношения между величиной зоны роста и уровнем пролиферации в субкапсулярной области эксплантата при культивировании нервной ткани

фото Соотношения между величиной зоны роста и уровнем пролиферации в субкапсулярной области эксплантата при культивировании нервной ткани
При морфологическом исследовании эксплантатов выявлено, что в опытной группе тканевая культура коры головного мозга 1-дневных, 21-дневных и 24-месячных крыс в полной мере сохраняет зональность морфотипической организации, характерную для эксплантатов контрольной группы. Зона роста представлена нейроглиальными клетками и нейробластами. В краевой зоне эксплантатов чаще встречаются более крупные дифференцированные нейробласты. В глубоких слоях коры эксплантатов опытной группы выявлены хорошо сохранившиеся пирамидные нейроны. Эти клеточные элементы имеют вид вытянутого треугольника или пирамиды с хорошо выраженным апикальным дендритом и содержат крупные ядра. В узкой промежуточной субкапсулярной зоне, имеющей более плотный нейропиль, нейральные элементы располагаются более концентрированно в виде небольших групп клеток с тесным прилеганием соседних клеточных мембран друг к другу. Более дифференцированные нейробласты имеют больший объем цитоплазмы и содержат элементы пластинчатого комплекса, большее количество цистерн и везикул гранулярного и гладкого эндоплазматического ретикулума, липидные включения, многочисленные полисомы и лизосомоподобные тельца.

Достаточно часто в цитоплазме нервных клетках тканевой культуры коры мозга выявляются локальные деструктивные изменения, миелиноподобные образования и аутофаголизосомы. В контрольной группе эксплантатов зрелые нейроны практически не выявляются. Сразу за промежуточной зоной (в глубь эксплантатов) локализуются группы клеток с цитолизом, погибшие путем некроза, и с морфологическими признаками дегенерации и гибели в форме апоптоза.


При иммуноокрашивании на PCNA ядра пролиферирующих клеток в контрольной группе относительно равномерно распределены в краевых зонах эксплантатов коры, при этом количественная плотность PCNА-положительных ядер составляет 572+41 на 1 мм2 площади зоны роста. В этих же зонах располагается основная масса клеток с позитивной реакцией на ядрышковые организаторы. Следует отметить, что окрашивание препаратов методом AgNOR позволяет отчетливо дифференцировать ядра нейроглиальных элементов, имеющих продолговатую форму, более плотную кариоплазму и концентрирующихся в краевой зоне, от более крупных светлых ядер нейробластов, образующих зону роста эксплантатов.

По данным компьютерного анализа, количественная плотность интерфазных клеток в зоне роста соответствует 3832+81 на 1 мм2, а апоптотических клеток — 7587±334. Средняя площадь среза ядер нейробластов составляет 27,0+0,23 мкм2, а средний размер одной зоны ядрышкового организатора — 1,53 ± 0,07 мкм2. В ядрах нейробластов выявляются от 1 до 5 зон ядрышковых организаторов, при их интегральном содержании 15,3 ± 0,7%. По данным компьютерного анализа, после добавления кортагена количественная плотность PCNA-позитивных ядер в органотипической культуре коры мозга достоверно увеличивается до 721 ±49 (р<0,05), а содержание ядер с позитивной реакцией на ядрышковые организаторы достигает 4116 ± 48 (р = 0,02). Средняя площадь сечений интерфазных ядер возрастает до 28,9 ± 0,29 мкм2, а размеры зон ядрышковых организаторов увеличиваются на 16% (р = 0,02). Количественная плотность апоптотических клеток в краевых зонах эксплантатов на 21% ниже, чем в контроле и составляет 5989±320 (р-0,01).


Анализ корреляционных отношений между изученными параметрами показывает, что эффекты кортагена проявляются в значимой стимуляции пролиферативной и функциональной активности основных клеточных элементов тканевой культуры коры мозга.

Комплексный анализ результатов гистохимических, иммуногистохимических, электронно-микроскопических и корреляционных исследований позволяет утверждать, что кортаген обладает специфическим нейротрофическим действием на органотипическую культуру коры головного мозга животных различного возраста. Синтетический тетрапептид кортаген обладает выраженным стимулирующим действием на морфофункциональные характеристики соответетвующих органотипических культур. Объективно регистрируемые эффекты проявляются в морфологической сохранности тканевых культур, а также в усилении клеточной и внутриклеточной форм регенерации клеток. Позитивные эффекты кортагена коррелируют с усилением функциональной активности зон ядрышковых организаторов клеточных популяций, специфически чувствительных к этому цитогену. В условиях тканевой культуры коры головного мозга 1-дневных крыс проявляется тканеспецифическое действие кортагена — он снижает уровень спонтанной гибели нервных клеток, усиливает регенераторно-адаптационные процессы в пролиферирующих и дифференцирующихся нейробластах, тем самым оказывая нейротрофическое и стабилизирующее действие на морфологическую сохранность и регенерацию нервной ткани.

Таким образом, при исследовании комплексных пептидов в органотипической культуре тканей, взятых от молодых и старых животных, обнаружена тканеспецифичность их действия.


Выраженная тканеспецифичность действия цитомединов по отношению к тканям от старых животных создает основу использования пептидных биорегуляторов в гериатрической практике. При этом эффекты пептидов в ряде случаев различаются в зависимости от возраста животных. Известно, что процесс старения характеризуется сложным комплексом молекулярно-генетических и биохимических изменений, сопровождающихся дезорганизацией пептидергической системы регуляции функций организма. При изучении процессов возрастной инволюции органов и тканей организма выявлено снижение в них интенсивности синтеза белка, продукции физиологически активных веществ пептидной природы, ослабление чувствительности к ним клеток-мишеней, что позволило сделать вывод о важной роли пептидов в регуляции механизмов старения. Результаты биотестирования пептидов в органотипической культуре тканей, взятых от крыс разного возраста, показали, что с увеличением возраста ткани-мишени становятся чувствительными не только к воздействию соответствующих данной ткани пептидов, но и к воздействию некоторых других пептидов. Это свидетельствует о координирующем действии пептидов на уровне межклеточных взаимодействий, нарушающихся в процессе старения.

В дальнейших исследованиях, с применением ряда биохимических методов изучения лиганд-рецепторных взаимодействий, предстоит выяснить тонкие механизмы регуляторного действия пептидов. Известно, что информационные отношения, как внутри отдельных функциональных систем, так и в межсистемных связях в целом организме, весьма чувствительны к различным воздействиям. В основе этих процессов лежит дифференцированная селекция информационных сигналов пептидных молекул. Учитывая тот факт, что старение сопровождается изменением экспрессии тканесиецифических генов, следствием которого является нарушение синтеза регуляторных пептидов в различных органах и тканях, пептиды можно рассматривать в качестве информационна регуляторов генетической стабильности.


Оцените статью: (11 голосов)
4 5 11
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.