Соотношения между величиной зоны роста и уровнем пролиферации в субкапсулярной области эксплантата при культивировании лимфоидной ткани

фото Соотношения между величиной зоны роста и уровнем пролиферации в субкапсулярной области эксплантата при культивировании лимфоидной ткани
В 1 -е сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов селезенки крыс разного возраста на коллагеновой подложке и начиналось выселение по периферии эксплантата пролиферирующих и мигрирующих клеток, составляющих периферическую зону роста от края эксплантата. Именно в этой зоне при фазово-контрастной микроскопии производился морфометрический анализ ИП. Через 3 суток, если в эксперименте происходила стимуляция развития зоны роста, ИП экспериментальных эксплантатов увеличивался по сравнению с ИП контрольных эксплантатов. В случаях замедления или угнетения развития зоны роста ИП эксплантатов понижался по сравнению с контрольными значениями ИП. Следует отметить, что выселение клеток не было равномерным по всей окружности эксплантата, а происходило только в местах прорыва капсулы, образовывающейся при культивировании фрагмента селезенки. Мигрирующие из эксплантатов клетки также наиболее часто выявляются в зонах капсулы, лишенных клеток мезотелия.

В контроле на препаратах, иммуноокрашенных на PCNA, пролиферирующие клетки сконцентрированы в области капсулы. По данным компьютерного анализа, количественная плотность PCNA-позитивных ядер в центральной зоне в 100 мкм нейтральнее капсулы составляет 10642 ± 284 на 1 мм2 площади паренхимы. В этих же зонах количественная плотность погибших клеток по ядрам, окрашенным методом Мозера, почти в 2 раза выше — 22983 ± 488. В ядрах интерфазных клеток определяются 1-2 ядрышковых организатора. Содержание клеток с зонами ядрышковых организаторов определяется в количестве 4450 на 1 мм2.


При действии вилона в культуре ткани селезенки 1-дневных крысят периферическая зона роста, определяемая морфометрически при фазово-контрастной микроскопии, уменьшалась на 40%+3 (ге=31, р<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (п=25). Как мы отмечали в предыдущем разделе лекции, это может быть связано с процессами селекции лимфоцитов в селезенке в период неонатального развития, так как уже у 21-дневных крыс вилон начинает стимулировать периферическую зону роста эксплантатов. При изучении препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, существенных изменений в гистологическом строении периферической зоны эксплантатов 3-дневных крыс после добавления в среду культивирования вилона не выявлено. Вместе с тем по сравнению с контрольной группой в более отдаленных от капсулы в центральном направлении участках эксплантатов паренхима органа выглядит сохранившейся гораздо лучше.

Результаты сравнительного иммуногистохимического исследования показывают, что в опытной группе эксплантатов от 3-дневных крысят в области капсулы и в субкапсулярной зоне определяется более высокая концентрация пролиферирующих клеток. По данным компьютерного анализа, количественная плотность PCNA-позитивных ядер в периферической зоне увеличивается до 11619 ± 368, а плотность погибших клеток снижается до 17719 ± 1558. В то же время содержание клеток с ядрышковыми организаторами определяется на уровне контрольной группы. Вилон в культуре ткани селезенки 21-дневных крысят усиливал развитие периферической зоны роста на 35+1 % (п=30, р<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов («=25).


Количественная плотность PCNA-позитивных ядер в контроле составляет 6549 ± 508 на 1 мм2, а плотность погибших клеток — 15 919 ±567. При окрашивании на ядрышковые организаторы по периферии эксплантатов 3-недельных крыс контрольной группы выявляется 2714 ± 120 функционирующих интерфазных клеток. На серийных срезах в соответствующих зонах локализуются единичные Ig-позитивные клетки. При действии вилона найдено, что большая часть пролиферирующих клеток сконцентрирована в 100-микронной периферической зоне, однако в отличие от предыдущей группы отдельные ядра с интенсивной реакцией на PCNA обнаруживаются даже в центральных зонах органотипической культуры среди полей погибшей ткани. Количественная плотность пролиферирующих клеток снижается до 4912 ± 246 на 1 мм2, а плотность погибших клеток — до 11546 ± 478. В то же время количественная плотность клеток с ядрышковыми организаторами увеличивается до 3536 ± 101, а на соответствующих серийных срезах выявляются скопления иммуноглобулин-позитивных клеток в виде небольших групп.

У 24-месячных крыс вилон угнетал зону роста эксплантатов селезенки на 25+3% (га=23, р<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (?г=22). Капсула контрольных и экспериментальных эксплантатов относительно толстая, состоит из плотной волокнистой соединительной ткани, содержащей, кроме клеток, многочисленные коллагеновые и ретикулиновые волокна. На значительном протяжении определяется полный некроз соединительно-тканной основы и гомогенизация фибриллярных структур.


При микроскопическом исследовании фрагментов селезенки старых животных отмечается значительное сужение подкапсульной зоны регенерации. В контрольных эксплантатах редкие клетки с PCNA-позитивными ядрами диффузно распределены в 100-микронной подкапсульной зоне. Их количественная плотность существенно меньше, чем у молодых животных, и составляет 1400 ± 170 клеток на 1 мм2. Клетки с позитивной реакцией на ядрыш-ковые организаторы располагаются преимущественно в периферической зоне поодиночке либо образуют небольшие группы.

Гистологический рисунок периферической зоны эксплантатов 2-летних крыс после добавления в среду культивирования вилона соответствует вариантам контрольной группы. Однако визуализируемая зона регенерации расширяется. Ретикулярные клетки выявляются в двух различных тканевых модификациях: единично рассеянные клетки и относительно крупные ретикулярные комплексы. Обращает внимание хорошая сохранность цитоплазмы клеток в таких комплексах и ультраструктурные признаки внутриклеточной формы регенерации. При иммуноокрашивании на PCNA определяется расширение зоны локализации пролиферирующих клеток, а по данным компьютерного анализа, их количественная плотность увеличивается на 25 % относительно контрольной группы и составляет 1745 ± 770 клеток на 1 мм2. Клетки с идентифицируемыми ядрышковыми организаторами выявляются не только по периферии, но и в более глубоких зонах. Их содержание превышает уровень контрольной группы более чем на 50%.

Количество погибших клеток одинаково велико в контрольных и экспериментальных эксплантатах. Результаты проведенных нами исследований показывают, что лимфоидная ткань в органотипической культуре селезенки в процессе ее культивирования погибает в центральной и периферической зонах эксплантатов от крыс 1-дневных и 24-месячных, но в эксплантатах от 21-дневных крыс пролиферирует в периферической зоне роста. Когда ИП периферической зоны роста снижен по отношению к контролю в эксплантатах 1-дневных и 24-месячных животных, наблюдается увеличение показателя количественной плотности PCNA-позитивных ядер (NPCNA). В эксплантатах 3-недельных животных, наоборот, при увеличении ИП зоны роста снижен показатель количественной плотности PCNA-позитивных ядер (NPCNA). Это интересное явление, возможно, связано в какой-то степени с тем, что усиление пролиферативного потенциала в центральной зоне снижает возможности пролиферации клеток в периферической зоне, и наоборот, — снижение пролиферации в центральной зоне (21-дневных крыс) ведет к усилению пролиферативных процессов в периферической зоне.

Известно, что большинство тканей и органов обладают способностью к регенерации, различны лишь ее формы в зависимости от структурно-функциональной специализации их клеточных элементов. Как следует из представленных выше материалов, для эксплантатов селезенки молодых животных наиболее характерна регенерация ткани путем гиперплазии клеток. По данным количественного анализа, объективно регистрируемым эффектом влияния вилона на эксплантаты 1-дневных животных является усиление пролиферативной активности клеток в центральных зонах зонах регенерации (на 9%) и снижение количественной плотности погибших спленоцитов (на 22 %). Вместе с тем периферическая зона роста эксплантатов от 1-дневных животных заметно ниже, чем в контроле (на 40 %). Для органотипической культуры 21-дневных крыс при действии вилона в центральной зоне характерно достоверное снижение числа погибших клеток (на 38%) и увеличение числа активно функционирующих стромальных элементов (на 29%). Отличительной характеристикой действия вилона на органотипическую культуру селезенки 21-дневных крыс является достоверное снижение пролиферативной активности спленоцитов (на 10%). На этом фоне резко увеличивается (на 35 %) периферическая зона роста (на 35 %).

Объяснение этого феномена может лежать в генетически запрограммированных для этого возраста животных процессах дифференцировки клеток селезенки. Действительно, появление в пульпарных тяжах при действии вилона молодых дифференцирующихся ретикулярных и плазматических клеток может свидетельствовать о выходе части обновляющихся клеток из цикла пролиферации, их дифференцировке и функциональном созревании. Прямым доказательством этому может служить достоверное увеличение числа клеток с ядрышковыми организаторами, а косвенным подтверждением — появление скоплений иммуноглобулинпозитивных клеток на серийных срезах этих эксплантатов.


Оцените статью: (10 голосов)
4 5 10

2007-2016 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.