Влияние пептидов тимуса в сочетании с конканавалином А на развитие фрагментов вилочковой железы и селезенки

фото Влияние пептидов тимуса в сочетании с конканавалином А на развитие фрагментов вилочковой железы и селезенки
Целью работы в данной лекции было изучение развития лимфоидной ткани (эксплантатов вилочковой железы и селезенки) крыс различного возраста в органотипической культуре ткани в присутствии эффективных концентраций тималина, тимогена и вилона в сочетании со специфическим митогеном лимфоцитов — конканавалином А (Кон А). Исследуемые препараты добавлялись в культуральную среду в концентрациях 2-200 нг/мл. В качестве митогенного агента для лимфоидной ткани использовался Кон А фирмы Sigma (США), который добавлялся в концентрации 10 мкг/мл. В 1-е сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение нроли-ферирующих лимфоцитарных клеток тимуса и селезенки по периферии эксплантата. Через 3 суток, если в эксперименте происходила стимуляция пролиферации, ИП экспериментальных эксплантатов увеличивался по сравнению с ИП контрольных эксплантатов. В случаях замедления или угнетения пролиферации лимфоцитов ИП эксплантатов понижался по сравнению с контрольными значениями ИП.

При культивировании ткани вилочковой железы 1-дневной крысы выявлено, что вилон и тимоген угнетают развитие эксплантатов при концентрациях 2 и 10 нг/мл. Так, при концентрации вилона 2 нг/мл ИП эксплантатов вилочковой железы был на 36+5% («=10, р<0,05) ниже контрольного значения ИП (п= 12), а при концентрации 10 нг/мл — на 21+5% (и=12,р<0,05) ниже контрольного значения ИП. Тимоген в тех же концентрациях вызывал статистически недостоверное снижение ИП эксплантатов на 12-18% по сравнению с контрольными эксплантатами. Тималин в концентрациях 5, 50 и 100 нг/мл вызывал резкую стимуляцию развития ткани вилочковой железы, что приводило к увеличению ИП эксплантатов соответственно на 91+5% (и=10, р<0,05), 68+5% (я-8, Р<0,05) и 56+7% (л-11,р<0,05) по сравнению с контрольными значениями ИП (и=12).


Увеличение концентрации тималина до 100 нг/мл приводило к угнетению развития эксплантатов вилочковой железы. В дальнейших опытах на всех тканях использовались эффективные концентрации препаратов, которые составляли 2 нг/мл для вилона и тимогена и 5 нг/мл для тималина. При культивировании ткани вилочковой железы 21-дневной крысы наблюдалось противоположное действие вилона и тимогена — имелась тенденция стимуляции развития эксплантатов на 15-24% по сравнению с контрольными эксплантатами, однако не происходило статистически достоверного угнетения, как это выявлялось при культивировании вилочковой железы 1-дневной крысы. Эффективная концентрация тималина продолжала стимулировать развитие эксплантатов вилочковой железы и 21-дневных крыс: ИП эксплантатов был на 200+15% («=12, /?<(),05) выше контрольного значения ИП (я=10).

Точно такие же тенденции, в зависимости от возраста животных, от которых брались ткани вилочковой железы, наблюдались и при действии Кон А в концентрации 10 мкг/мл. В эксплантатах от 1-дневных животных Кон А оказывал, подобно вилону и тимогену, угнетающее развитие эксплантатов действие, что приводило к снижению ИП на 34+7 % по сравнению с контрольными эксплантатами. Однако в эксплантатах вилочковой железы от 21-дневных крыс уже выявлялся митогенный эффект Кон А, что приводило к увеличению ИП на 24+1 % по сравнению с ИП контрольных эксплантатов. При исследовании возможного потенцирующего эффекта Кон А и полипептидных фракций вилочковой железы выявилось, что совместное применение Кон А и эффективных концентраций вилона приводит к противоположным действию Кон А результатам и также зависит от возраста животных, от которых брались ткани для культивирования.


В эксплантатах вилочковой железы 1-дневной крысы введение в питательную среду Кон А и вилона приводило к достоверному увеличению ИП эксплантата на 80+3% («=16,р<0,05) по сравнению с контрольными значениями ИП («=15), в то время как при изолированном действии каждого из этих веществ происходило угнетение развития культивируемой вилочковой железы. И наоборот, в эксплантатах вилочковой железы от 21-дневных животных при совместном применении Кон А и вилона ИП эксплантатов был достоверно на 55+7% («=14, р<0,05) ниже контрольных значений ИП («=12), хотя изолированное действие как вилона, так и Кон А приводило к увеличению ИП эксплантатов.

У тимогена, в отличие от вилона, противоположное действию Кон А влияние наблюдалось только при культивировании эксплантатов от 1-дневных животных. Видна тенденция к увеличению ИП эксплантатов на 20+3% («=18,р<0,05) по сравнению с контрольными значениями ИП(«=24) при совместном применении тимогена и Кон А, хотя их изолированное применение приводило к угнетению развития культивируемой вилочковой железы. В эксплантатах от 21-дневных животных совместное применение тимогена и Кон А также приводило к увеличению ИП на 30+2 % («=21, р<0,05) по сравнению с контрольными значениями ИП («=20), т. е. не было противоположного изолированному действию обоих препаратов эффекта. Тималин совместно с Кон А в эксплантатах вилочковой железы от животных обоих возрастов вызывал снижение ИП эксплантатов по сравнению с контрольными значениями, и, таким образом резкое стимулирующее действие тималина исчезало в обоих случаях.

При культивировании эксплантатов селезенки также выявились различия действия полипептидных фракций вилочковой железы и Кон А в зависмости от возраста донора.


В эксплантатах селезенки 1-дневных животных действие изолированных вилона и Кон А по направленности совпадало с их действием на эксплантаты вилочковой железы животных этого возраста. Так, при действии вилона ИП эксплантатов селезенки достоверно снижался на 40+7% («=18, р<0,05) по сравнению с контрольными значениями (я=15). Кон А также вызывал снижение ИП эксплантатов на 42+2% («= 12, р<0,05) по сравнению с контрольными значениями (и=16). Однако совместное применение вилона и Кон А вызывало стимуляцию развития эксплантатов, и их ИП увеличивался до 96+5% («=14, р<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов (и=18). Введение в культуральную среду тимогена приводило к статистически достоверному увеличению ИП эксплантатов селезенки на 26+5% («=15, /?<0,05) по сравнению с контрольными значениями («=19), а совместное применение эффективных концентраций тимогена и Кон А вызывало резкую стимуляцию развития эксплантатов, и ИП превышал на 154+7% («=12, р<0,05) контрольные значения ИП («-16). В отличие от эксплантатов вилочковой железы крыс обоего возраста тималин не оказывал существенного влияния на эксплантаты селезенки от 1-дневной крысы, однако совместное его применение с Кон А вызывало достоверное снижение ИП эксплантатов на 51+7% («=24, Р<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов («=21).

Противоположное по направленности культивированию тканей 1-дневной крысы явление происходило при культивировании селезенки 21-дневной крысы. Вилон увеличивал ИП эксплантатов, однако наиболее резкая стимуляция пролиферации лимфоцитов происходила при действии Кон А, что и приводило в этом случае к увеличению ИП эксплантатов на 310+21 % (и=15,р<0,05) по сравнению с ИП контрольных эксплантатов селезенки («=18).


Совместное воздействие вилона и Кон А вызывало достоверное повышение по сравнению с контрольными значениями («=21) ИП эксплантатов на 126+15% («=22,р< 0,05). Аналогично, наблюдалось повышение ИП эксплантатов при действии тимогена — на 143+11 % («=17, р<0,05) и при сочетанном действии тимогена и Кон А — на 59+10% («=15, р<0,05) по сравнению с контрольными значениями («=14). Эффективные концентрации тималина стимулировали развитие эксплантатов, и ИП повышался на 44+7 % («=Т5,р<0,05) по сравнению с контрольными значениями («=16), но совместное действие тималина и Кон А приводило к недостоверному увеличению ИП эксплантатов. Полученные данные свидетельствуют о том, что при развитии ткани вилочковой железы 1-дневного животного вилон и тимоген угнетали развитие зоны роста, а при культивировании этой ткани от 21-дневного животного происходило явление противоположной направленности — вилон и тимоген в тех же концентрациях стимулировали увеличение зоны роста, и она увеличивалась, по сравнению с контрольными эксплантатами, на 15-25%.

Аналогичная картина наблюдалась в культурах фрагментов селезенки от 21-дневной крысы, где тимоген увеличивал ИП эксплантатов на 143% по сравнению с контролем. В культуре 1-дневной селезенки только тимоген способствовал увеличению ИП эксплантатов на 60%, а вилон снижал ИП на 38 % по сравнению с контролем. Таким образом, при культивировании ткани селезенки только вилон действовал так же, как он действовал в разновозрастных культурах тимуса, а действие тимогена в культурах селезенки 1- и 21-дневных животных было одинаковым — стимулирующим. Тималин оказывал выраженное стимулирующее развитие зоны роста действие в культурах тимуса 1- и 21-дневных крыс и в культуре селезенки 21-дневной крысы (ИП эксплантатов увеличивался до 90-200% по сравнению с контролем), и лишь в культуре селезенки 1-дневной крысы тималин не только не оказывал стимулирующего действия, но имелась тенденция к угнетению развития зоны роста. В опытах с применением Кон А выявилось, что его действие полностью совпадает с действием вилона, т. е. в культурах тимуса и селезенки 1-дневных животных он угнетает развитие зоны роста, что ведет к снижению ИП эксплантатов на 38-45 %, а в культурах обеих тканей от 21-дневных крыс, наоборот, стимулирует зону роста. Причем наиболее выраженная стимуляция происходит в тканях селезенки 21-дневных крыс, когда ИП эксплантатов увеличивается на 310% по сравнению с контролем.

В проведенных экспериментах по сочетанному применению пептидов тимуса и Кон А обнаружены следующие явления. В тканях тимуса и селезенки 1-дневных крыс вилон совместно с Кон А приводил к достоверной стимуляции зоны роста эксплантатов, когда ИП увеличивался 25-80% по сравнению с контролем. В предыдущих опытах выявилось, что раздельное применение каждого из этих препаратов вело к угнетению развития зоны роста и снижению ИП эксплантатов. Противоположная картина была в культурах тканей 21-дневных крыс, в которых сочетанное применение вилона и Кон А приводило к угнетению зоны роста, хотя раздельное применение этих препаратов давало в предыдущих опытах стимулирующий эффект, особенно в селезенке. Так, в культуре тимуса 21-дневной крысы ИП эксплантатов при сочетанном применении препаратов снижался на 50 % по сравнению с контролем, а в культуре селезенки от животного того же возраста, хотя ИП оставался повышенным по сравнению с контролем на 126%, но этот показатель был значительно ниже того, какой регистрировался при отдельном применении Кон А (310%), т. е. происходило торможение развития зоны роста. В отношении тимогена в сочетании с Кон А наблюдалась аналогичная картина, за исключением того, что в культуре тимуса 21-дневной крысы не происходило снятия эффекта стимуляции зоны роста, как это происходило при действии вилона. В культуре селезенки 21-дневной крысы ярко проявлялось угнетающее действие совместного применения тимогена и Кон А, когда ИП эксплантатов становился только на 55 % выше, чем в контроле, в то время как при изолированном действии Кон А и тимогена ИП был на соответственно 310 и 143 % выше, чем в контроле.

В отношении тималина не всегда наблюдался такой снимающий действие Кон А эффект. Этот эффект регистрировался только в культурах тканей от 21-дневных крыс. Так, в культуре тимуса 21-дневной крысы, несмотря на то что отдельно тималин вызывал значительную стимуляцию ИП эксплантатов (до 200% по сравнению с контролем), при действии его совместно с Кон А происходило снижение ИП ниже контрольных значений. В культуре селезенки 21-дневной крысы ИП эксплантатов при сочетанном действии также снижался с 310 до 28%.В культурах тканей 1-дневных животных тималин не отменял эффекта действия Кон А. Таким образом вилон действует на все четыре исследуемые ткани, как и Кон А, т. е. на молодых тканях включает программу угнетения клеток, а на старых включает пролиферацию. На тимус действуют как Кон А только вилон и тимоген, причем у вилона сильнее выражено угнетение на 1-дневных тканях, а у тимогена сильнее стимуляция на 21-дневных. Вилон в дозах 2 и 10 нг/мл действовал на все исследованные ткани аналогично действию конканавалина А — специфического митогена лимфоцитов, т. е. в тканях 1-дневных животных происходило угнетение, а в тканях 21-дневных животных — увеличение зоны роста эксплантатов после 3 суток культивирования. Таким же образом влиял на эксплантаты тимоген в дозах 2 и 10 нг/мл, однако в отличие от вилона он стимулировал развитие эксплантатов селезенки 1-дневных крыс. Тималин в дозе 5 нг/мл оказывал стимулирующее влияние на развитие эксплантатов вилочковой железы животных обоих возрастов и на развитие эксплантатов селезенки 21-дневных крыс.

При сочетанном применении какого-либо из пептидов с конканавалином в дозе 10 мкг/мл обнаружено ослабление действия конканавалина, т. е. на тканях от 1-дневных крыс вилон и тимоген устраняли угнетающее развитие эксплантатов действие конканавалина, а на тканях от 21-дневных крыс, наоборот, — ослабляли стимулирующий развитие эксплантатов эффект конканавалина. Тималин понижал только стимулирующее влияние конканавалина на эксплантаты тканей от 21-дневных животных. Выявляется различное участие полипептидных фракций тимуса и их синтетических аналогов в процессах стимуляции и угнетения развития вилочковой железы и селезенки в различные возрастные периоды онтогенеза млекопитающих.


Оцените статью: (10 голосов)
3.9 5 10
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.