Функциональная морфология эксплантата в органотипической культуре ткани

фото Функциональная морфология эксплантата в органотипической культуре ткани
В типичной картине структурной организации периферической зоны эксплантатов различных тканей выделяется прежде всего периферическая зона роста, именно в которой и проводился морфометрический анализ индекса площади (ИП) эксплантатов. Затем выявляется капсула эксплантата, представленная одним-двумя слоями фибробластов веретеновидной формы. Ядра фибробластов имеют удлиненную овальную форму, в цитоплазме определяется хорошо развитая гранулярная цитоплазматическая сеть и лизосомоподобные гранулы. Среди фибробластов капсулы часто выявляются макрофаги с характерными полиморфными гранулами. С поверхности капсула покрыта мезотелием — однослойным плоским эпителием. Обращает внимание отсутствие сплошного мезотелиального пласта. Клетки мезотелия часто отходят друг от друга, округляются и, по-видимому, отрываются от базальной мембраны. В результате на месте отпавших клеток образуются обширные просветы, через которые часть клеток мигрирует за пределы эксплантата. Среди мигрирующих клеток типируются макрофаги, фибробласты и специализированные клетки, соответствующие типу ткани, — например лимфобласты в эксплантатах тимуса и селезенки, нейробласты в эксплантатах коры головного мозга и подкорковых структур. За счет этого и формируется периферическая зона роста эксплантатов, при измерении которой определяется индекс площади.

Наиболее интенсивная миграция клеток из эксплантатов наблюдается в зоне разрушающейся капсулы. При морфологическом исследовании эксплантатов выявлено, что и в опытной группе (при добавлении в культуральную среду пептидов в различных концентрациях) тканевая культура, например, коры головного мозга 1-дневных крыс в полной мере сохраняет зональность морфотипической организации, характерную для эксплантатов контрольной группы.


Зона роста представлена нейроглиальными клетками и нейробластами. Существенных изменений в строении нейропиля не определяется. Однако следует отметить, что визуально в краевой зоне эксплантатов чаще встречаются более крупные дифференцированные нейробласты. Кроме того, в глубоких слоях коры двух эксплантатов опытной группы выявлены хорошо сохранившиеся пирамидные нейроны. Эти клеточные элементы имеют вид вытянутого треугольника или пирамиды с хорошо выраженным апикальным дендритом и содержат крупные ядра.

Электронно-микроскопически ядра большинства нейробластов в зоне роста тканевых культур опытной группы и в промежуточной зоне имеют неровные контуры, часто с глубокими инвагинациями. Небольшие глыбки гетерохроматина относительно равномерно распределены по кариоплазме. Достаточно часто выявляются делящиеся нервные клетки. У большинства нейронов хорошо развит комплекс Гольджи и элементы гранулярного эндоплазматического ретикулума. Кроме того, в нейропиле и цитоплазме нейробластов реже выявляются участки дегенеративных изменений и аутофагосомы. В совокупности эти ультраструктурные характеристики свидетельствуют о повышении морфофункциональной активности нервных клеток в опытной группе и усилении в них процессов внутриклеточной регенерации. На полутонких срезах по краям тканевой культуры отчетливо выявляется зональное распределение клеток. В зоне роста эксплантатов нейропиль имеет рыхлое строение, а клеточный слой состоит из мигрирующих нейроглиальных элементов и небольших скоплений ней-ральных клеток, представленных различными по размерам и степени дифференцировки нейробластами.


На срезах видно, что в нейропиле культур контрольной группы имеются широкие экстрацеллюлярные пространства и часто встречаются дегенерерирующие профили отростков нейробластов и глиальных элементов.

Значительная часть нервных клеток в зоне роста представлена нейробластами, сохраняющими свойственные им морфологические и цитологические особенности: овальную или грушевидную форму тела и относительно крупное светлое ядро с одним-двумя ядрышками. Электронно-микросконически у менее дифференцированных нейробластов вокруг ядра визуализируется узкий ободок цитоплазмы, в котором располагаются немногочисленные органеллы: единичные или в виде розеток рибосомы, мелкие митохондрии и короткие цистерны зернистого эндоплазматического ретикулума. Нейропиль культуры состоит из отростков нейробластов и глиальных клеток, между которыми видны светлые промежутки разной величины. Результаты предварительного изучения общей патоморфологической картины эксплантатов на серийных срезах были положены в основу реконструкции гистологической модели исследуемой органотипической культуры. В связи с выраженным полиморфизмом эксплантатов и зональной неоднородностью локализации и распределения по паренхиме живых клеток, зон регенерации ткани и ее гибели, тестовые поля для количественного анализа плотности PCNA-позитивных ядер (NPCNA), интерфазных клеток, содержащих ядрышковые организаторы (NAgNOR) и погибших клеток по ядрам, импрегнированным по методу Мозера, располагали в периферической зоне эксплантатов на расстоянии не более 100 мкм от сохранившихся участков капсулы.

Сразу под капсулой в направлении к центру эксплантата выявляются отдельные клетки или группы клеток с цитолизом, погибшие путем некроза и с морфологическими признаками гибели в форме апоптоза.


При изучении препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, определяется выраженная зональная неоднородность патоморфологической картины эксплантатов. Живые по морфологическим показателям клетки выявляются по периферии центральной зоны исследуемых фрагментов ткани. Ширина этой зоны варьирует от 100 до 200 мкм и заметно сужается с увеличением возраста животных. Предварительные исследования, выполненные на серийных срезах, показали, что зональный полиморфизм эксплантатов на препаратах определяется несколькими факторами: пространственной ориентацией залитого в парафин фрагмента ткани, уровнем прохождения среза, а также наличием и степенью сохранности капсулы органа. Гистологический рисунок ткани, соответствующий возрасту и виду животных, определяется лишь в подкапсульной области центральной зоны. Погибающие клетки диффузно распределены по периферии центральной зоны или концентрируются в виде характерных скоплений в центральной зоне эксплантатов. Характер их распределения при органотипическом культивировании определяется особенностью диффузии кислорода и питательных веществ из культуральной среды в глубь эксплантатов и их недостатком на определенном расстоянии от капсулы. Гистологические данные, что в диапазоне 100 мкм начинается гибель клеток, согласуются с теоретическими расчетами, показывающими, что в ткани кислород практически полностью поглощается клетками, находящимися на определенном расстоянии от источника его поступления. .




Оцените статью: (14 голосов)
3.93 5 14
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.