Методологические комментарии

фото Методологические комментарии
Материал исследования. Объектом исследования служил операционный и секционный материал от 237 человек (229 женщин и 8 мужчин) в возрасте от 19 до 64 лет. Операционный материал был получен от 206 пациенток 43-64 лет при пластических операциях круговой подтяжки лица и от 14 пациентов 19-27 лет при вмешательствах, связанных с хирургической коррекцией косметических недостатков в той же анатомической области. Также исследовали аутопсийный материал, полученный от 16 практически здоровых женщин молодого возраста (19-25 лет), погибших в результате несчастных случаев.

Отбор пациентов проводили с учетом типа светочувствительности кожи на основании самооценки реакции кожи на УФО. В исследование были включены только пациенты с первым, вторым и третьим типом светочувствительности. При опросе пациентов о воздействии инсоляции на кожу более половины больных (54%) указали, что любят загорать. При этом никто из обследованных лиц не использовал солнцезащитные средства. Клинические проявления фотостарения кожи, подверженной хронической инсоляции, отмечены практически у половины обследованных лиц.


Все пациенты были разделены на пять возрастных групп наблюдений. С учетом того, что среди обследованных лиц преобладали женщины, ярко выраженные возрастные колебания общего нейрогормонального статуса которых могли отразиться на полученных результатах, при разделении пациенток на группы наблюдений учитывали фазы их репродуктивной жизни. В 1-ю и 2-ю группы наблюдений вошли женщины от 19 до 51 года, у которых климактерические симптомы (изменения менструального цикла и проявления эстроген-дефицитного состояния) отсутствовали. Третью группу наблюдений составили пациентки 49-55 лет, находящиеся в перименопаузе, т. е. от первых проявлений климактерических симптомов до 2 лет после последней самостоятельной менструации. В 4-ю и 5-ю группы вошли женщины в постменопаузе (стойкое отсутствие менструальных кровотечений более 2 лет).Материалом для исследования хронологического старения служила кожа заушной, фотостарения — подверженная хроническому УФО кожа височной области.

Методы исследования. Для гистологического исследования кусочки кожи объемом 1 см3 фиксировали в 10%-ном нейтральном забуференном формалине (рН 7,2).


Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, комбинированным способом пикрофуксином по Ван Гизону и орсеином. Тучные клетки селективно выявляли 1%-ным раствором толуидинового синего (Fluka) в 0,5 М НС1 при рН 0,5. Динамику экспрессии клетками кожи нейроэндокринных регуляторных молекул оценивали по результатам иммуногистохимических реакций с моноклональными мышиными антителами к CgA (RTU NC1-CHROM, Clone LK2H10, Novocastra), ультраспецифичными кроличьими антителами к мелатонину (CIDteth Res. Comp; 1:100) и моноклональными мышиными антителами к серотонину (Anti-Serotonin, Clone 5НТ-Н209, Dako; 1:100). Также с помощью монокло-нальных мышиных антител (NCL-NOS-3, Clone RN5, Novocastra; 1:150) исследовали экспрессию эндотелиальной синтазы оксида азота (NOS-3), являющуюся конституционально эксирессируемой формой фермента, синтезирующего оксид азота из L-аргинина и молекулярного кислорода.

Для оценки особенностей иммунной системы кожи изучали экспрессию сигнальных молекул, опосредующих межклеточные взаимодействия при реализации первичного и адаптивного иммунного ответа: CD35 (моноклональные мышиные антитела NCL-CD35, Clone RLB25, Novocastra; 1:80) и CD-la (RTU NCL-CD-la-235, Novocastra), а также системы антигенов II класса ГКГ HLA-Dr (моноклональные мышиные антитела NCL-HLA II DR-LN3, Novocastra; 1:50).


Характеристику морфофункционального состояния эпидермиса и дермы проводили с использованием мышиных моноклональных антител к антигену Ki67 (NCL-Ki67-MM1, Novocastra; 1:200), инволюкрину (RTU NCL-INV, Clone SY5, Novocastra; 1:100) и белкам p53 (NCL-p53-D07, Novocastra; 1:50), Bcl-2 (NCL-bcl-2, Clone bcl-2/100/D5, Novocastra; 1:80) и Mcl-1 (NCL-Mcl-1, Clone 38G3, Novocastra; 1:20). Во всех иммуногистохимических реакциях в качестве вторых антител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные антимышиные или антикроличьи иммуноглобулины. Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit), с последующим проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином (все реагенты от Novocastra). Для оценки результатов гистологических и иммуногистохимических исследований использовали систему компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящую из светового оптического микроскопа Nikon Eclipse Е400, цифровой камеры Nikon DXM1200, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4 и программного обеспечения «Видеотест-Морфология 4.0».


Оцените статью: (13 голосов)
4.23 5 13

Cтатьи из раздела Геронтология:


Нейроиммуноэндокринные маркеры старения кожи 2
Особенности структурно-функциональной организации НИЭСК при старении кожи
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.