Принципы оценки иммунного статуса

фото Принципы оценки иммунного статуса
Иммунный статус определяется количеством и активностью лимфоидных и фагоцитарных клеток, находящихся в циркуляции, состоянием системы комплемента, факторов неспецифической резистентности, киллерными клетками, иммуноглобулинами, специфическими AT, ИЛ и другими показателями. Все параметры иммунного статуса можно разделить на: 1) неспецифические, отражающие общие изменения иммунной системы; 2) связанные с данной патологией опосредованно, и 3) специфические, устанавливающие конкретные иммунные механизмы заболеваний. Неспецифические показатели. Наиболее широко распространённые методы оценки иммунного статуса связаны с лимфоцитами. Для их выделения разработаны различные методические приёмы.

Создаются градиенты плотности сред, задерживающие именно эти клетки за счет их плотности: фиколл-верографин, фиколл-гипак, плазма-перколл и др. В ряде случаев от эритроцитов освобождаются с помощью различных лизирующих растворов и т.д. Оценка состояния трёх основных звеньев иммунитета — Т-, В- и фагоцитарного, разделяется на количественную и функциональную. Количественное тестирование популяций и субпопуляций лимфоцитов основано на характеристике специфических для каждого вида клеток рецепторов, по их способности связываться с Аг либо с клетками. Так, Т-лимфоциты, например, несут рецепторы к эритроцитам барана и образуют с ними так называемые Е-РОК. Подсчитав процент таких клеток и переведя его в абсолютные значения, можно определить содержание Т-лимфоцитов. В-клетки образуют розетки либо с эритроцитами мышей, либо с эритроцитами быка, нагруженными AT против них и комплементом — ЕАС-РОК.

Более чувствительной является идентификация клеток с помощью моноклональных AT против маркерных Аг популяций и субпопуляций лимфоцитов.


Исследуемые лимфоциты обрабатывают монокло-нальными AT (анти-CD), далее либо диагностикумами, нагруженными AT против «первых» AT, либо AT и их Fab-фрагментами (против «первых» AT), мечеными флуорохромами, дающими специфическое свечение в люминесцентном микроскопе. Созданы лазерные сортеры (проточные цитофлуориметры) для выявления субпопуляций лимфоцитов, меченых таким образом моноклональными AT.
Для оценки функциональной активности клеточного звена иммунитета используют 4 группы методов.
1. Постановка кожных проб ГЗТ.
2. Стимуляция лимфоцитов in vitro в РБТЛ
3. Функциональная оценка Т-хелперов.
4. Функциональная оценка Т-супрессоров (киллерных клеток и т. д.).Для постановки кожных проб используется: очищенный туберкулин (реакция Пирке), паротитный, стрептококковый, столбнячный, дифтерийный Аг, трихофитии, кандидин, стрептокиназа, динитрох-лорбензол и др.

Стимуляция лимфоцитов в РБТЛ основана на способности лимфоцитов при определённых условиях превращаться в увеличенные бластоподобные клетки, активно синтезирующие ДНК. Для характеристики функции Т-хелперов мононуклеарные клетки крови инкубируются с поликлональным активатором лимфоцитов митогеном лаконоса и количественно измеряют индуцированную им продукцию иммуноглобулинов. Далее в систему добавляют клетки с предполагаемой хелперной способностью и определяют прирост образования иммуноглобулинов. Для оценки функции Т-супрессоров воспроизводится описанная выше методика, но в культуру добавляют клетки с супрессорной активностью, регистрируя снижение суммарных иммуноглобулинов.

Одним из методов оценки функциональной активности В-лимфо-цитов является оценка синтеза иммуноглобулинов в культуре этих клеток, а также определение в сыворотке крови, слюне, кишечном содержимом количества иммунных глобулинов основных классов.


Для этого используется метод двумерной диффузии в агаровом геле, разработанный Манчини (в лунки агарового геля, содержащего AT к различным классам иммуноглобулинов, добавляют искомые сыворотки, содержащие Ig, образуются кольца преципитации, размер которых по номограммам позволяет определить концентрацию Ig разных классов). Дополнительным показателем в оценке гуморального иммунитета является определение концентрации естественных AT, например, изогемагглютининов (титр в норме 1:16—1:64), уровень AT к кишечной палочке, Аг коклюшного возбудителя, дифтерии, столбняка, поскольку подавляющее большинство людей иммунизировано данными Аг в плановом порядке, т.е. AT против указанных Аг должны быть у всех.

Для измерения функции системы фагоцитоза изучается микробоцидная способность, фагоцитарная активность, подвижность моноцитов и гранулярных лейкоцитов (гранулоцитов). Метаболическая способность определяется косвенным путем в тесте восстановления нитросинего тетразолия, используя спонтанную и индуцированную реакции. Кислородный метаболизм фагоцитов также изучают методом хе-милюминесценции, который обусловлен генерацией Н202 и супероксидного радикала и прямо коррелирует с киллерной способностью клетки. Применяющиеся методы позволяют определить непосредственно кислородный метаболизм, образование различных активных кислородных радикалов индивидуальными клетками. Последний анализ может выполняться на проточном цитофлуориметре.

Поглотительные возможности определяют в реакции фагоцитоза указанных клеток каких-либо объектов: бактерий, дрожжевых клеток, частиц латекса, зимозана и т.д.


Подсчитывается процент фагоцитирующих лейкоцитов и фагоцитарный индекс, отражающий среднее число поглощённых одним фагоцитом частиц при подсчете 100 клеток. Для оценки функциональных резервов фагоцитирующих клеток использовали фагоцитарную реакцию с определением фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа. Для определения переваривающей способности клеток реакцию учитывали через 30 мин и через 2 ч. В качестве стимулятора in vitro использовали продигиозан. Киллерная способность фагоцитов может быть определена непосредственно по киллингу живых дрожжей, который оценивается с помощью красителя акридинового оранжевого, применяются и специальные красители, позволяющие определить киллинг бактерий отдельными фагоцитами на проточном цитофлуориметре.

Подвижность фагоцитов, в частности нейтрофильных гранулоцитов или моноцитов периферической крови, измеряется либо по величине спонтанной миграции из капилляров за определённый промежуток времени, либо по измерению этой реакции в присутствии веществ, обладающих хемотаксическим действием. Анализируется также адгезия на поверхность или их агрегация, четко отражающие функциональную активность клеток, в том числе обусловливаемую молекулами адгезии. Определение рецепторов на нейтрофилах или моноцитах также проводится для оценки функциональной активности фагоцитарной системы. Оценка системы комплемента производится в гемолитической системе, состоящей из эритроцитов барана со специфической антисывороткой к ним. Сыворотку предварительно прогревают при 56° С в течение 30 мин для разрушения собственного комплемента, а затем добавляют её в исследуемую сыворотку как источник AT.


Рассчитывается 50% гемолиз, содержание комплемента выражают в единицах С'Н50 (единица активности комплемента, за которую принимают количество комплемента, вызывающее 50% лизис определённого количества сенсибилизированных специфическими AT эритроцитов).

Количественное определение компонентов комплемента и ингибиторов проводится иммунохимическим методом с использованием моноспецифических анти-сывороток по методу Манчини или в системе, где отсутствует какой-либо определённый компонент системы комплемента, а остальные ее компоненты присутствуют в избытке. Активность киллерных клеток измеряется в пробах с мишенями, мечеными радиоактивными изотопами, которые выделяются в культурную среду после разрушения клеток киллером.

К специфическим методам оценки иммунного статуса относят иммунофлуоресценцию — использование AT, меченых иммунофлуоресцирующим красителем, например флуоресцеи-ном изотиоцианатом, родамином и др. С их помощью обнаруживают места локализации Аг. В ультрафиолетовом свете они хорошо видны. При радиоиммунном методе используют меченые радионуклидами I131 или I125 (радиоизотопы йода) AT или Аг. Применяют стандартное количество антисыворотки, связывающей 70—80% меченого Аг. Затем в реагирующую систему вносят искомый немеченый Аг. Он конкурирует с меченым за AT. Суммарная радиоактивность реагирующей системы падает. Чем больше немеченого Аг в системе, тем в большей степени снижается её радиоактивность, которую можно измерить, и по полученным данным определить содержание искомого (немеченого) Аг в исследуемой смеси.Метод иммуноферментного анализа (ИФА) чувствителен и достаточно прост.


Реакцию обычно ставят в пластиковых планшетах, к полистиролу лунок фиксируют AT к Аг, который следует обнаружить в материале; в другой модификации можно использовать маркерный Аг. Далее вносится исследуемый субстрат, содержащий искомый Аг. Он соединяется с AT, образуя комплекс Аг-АТ. Не прореагировавший исследуемый субстрат удаляют и вместо него вносят AT, меченые каким-либо ферментом, например, пероксидазой хрена. Они присоединяются к комплексу Аг-АТ, адсорбированному на полистироле лунки. Далее в систему вносят вещество, дающее цветную реакцию в присутствии пероксидазы хрена. По интенсивности окрашивания количественно оценивается реакция.


Оцените статью: (13 голосов)
3.54 5 13
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.