Биохимические методы исследования

фото Биохимические методы исследования
Определение глюкозы
Определение глюкозы в спинномозговой жидкости осуществляется с помощью цветной реакции или на биохимическом анализаторе так же, как и в крови.

В норме в ликворе содержится глюкоза в пределах 2,8—3,9 ммоль/л. При остром и подостром серозном менингите содержание глюкозы увеличивается. Увеличение ее содержания в ликворе при нормальном содержании в крови наблюдается при явлениях раздражения оболочек мозга.

Определение содержания глюкозы в спинномозговой жидкости должно проводиться с исследованием сахара крови.

Унифицированный газооксидазный метод по окислению ортотолуидина
Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием перексидазы окисляет ортотолуидин с образованием синего хромогена. Обе реакции протекают одновременно при рН 4,8.

Необходимые реактивы:

1. Натрия хлорид — 9 г/л (изотонический раствор). Готовят, растворяя 0,9 г NaCl в 100 мл жидкости.

2. Цинка сульфат — 50 г/л, 5 г сульфата цинка (ZnSO4) растворяют в воде, объем доводят до 100 мл.

3.


Натр едкий — 0,3 ммоль/л готовят, растворяя в воде, доводят до 100 мл.

4. Натр едкий — 0,3 ммоль/л готовят, растворяя 1,2 г NaOH в 100 мл воды, концентрацию проверяют титрованием.

5. Ортотолуидина 1%-ный раствор: 1 г препарата растворяют в 100 мл 96° спирта. Раствор можно хранить в холодильнике в склянке с притертой пробкой в течение нескольких месяцев.

6. Ацетатный буферный раствор pH 4,8: смешивают 4 части 0,25 г уксусной кислоты и 6 частей 0,25%-ного ацетата натрия.

7. Глюкозооксидаза. Сухой препарат активностью 3000 ЕД/мг или больше.

8. Пероксидаза из крови — 1 мл растворяют в 5 мл ацетатного буфера.

9. Рабочий реактив: в 80 мм ацетатного буфера растворяют 2 мг глюкозооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют 1 мл 1%-ного раствора ортотолуидина и доводят объем буферным раствором до 100 мл. Рабочий реактив должен быть прозрачным, бесцветным или иметь слабо-зеленый оттенок, в этом случае он устойчив при хранении на холоде. Если же окраска интенсивная или спустя несколько часов после хранения начинает выпадать осадок, это значит, что ортотолуидин недостаточно чистый и его надо перекристаллизовать.

10.


Калибровочные растворы глюкозы. Глюкозу предварительно высушивают при 37 °С и хранят в эксикаторе. Сначала готовят основной раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего 180 мл вещества растворяют в 20 мл насыщенного раствора 0,3%-ной бензойной кислоты. Из этого раствора готовят рабочие калибровочные растворы, содержащие 3, 6, 9, 12, 15, 18 и 21 ммоль/л. Для этого берут 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3; 3,6 и 4,2 мл основного раствора и доводят насыщение раствором до 10 мл.

Ход определения
В центрифуженные пробирки вносят 1,1 мл сульфата цинка и 0,4 мл 0,3%-ого раствора NaOH, перемешивают. При этом образуется тонкий гель гидрата окиси цинка, в него впускают 0,1 мл спинномозговой жидкости, снова перемешивают и в течение 10 мин центрифугируют. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 3 мл рабочего реактива и осторожно перемешивают. Постепенно развивается окрашивание, которое возникает максимум через 13—15 мин, а затем постепенно уменьшается. Фотометрируют через один и тот же промежуток времени после добавления рабочего реактива в кюветах с длиной оптического пути 1 см, длина волны 625 нм холостого опыта.


При приготовлении калибровочного графика вместо проб крови берут 0,1 мл соответствующего калибровочного раствора. Расчет можно проводить по калибровочному графику, для построения которого на одной оси откладывают концентрацию глюкозы (моль/л), а на другой — величины экстинкции.

Определение хлоридов. Определение хлоридов может осуществляться методом титрования или на электролитном анализаторе.

Пониженное содержание хлоридов в ликворе характерно для менингита, особенно туберкулезного, при бруцеллезе, повышенное — при опухолях мозга, абсцессах мозга, эхинококкозе.

Определение мочевины, билирубина, холестерина.Имеет небольшое диагностическое значение.

Определение гликопротеинов и липопротеинов спинномозговой жидкости производят с помощью электрофореза на бумаге с предварительным сгущением жидкости.


Оцените статью: (7 голосов)
3.57 5 7

Cтатьи из раздела Лабораторные исследования:


Диагностика заболеваний
Микробиологическое исследование
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.