Химическое исследование

Определение белка осуществляется унифицированным методом с сульфациловой кислотой и на биохимическом анализаторе. Нормальное содержание белка в спинномозговой жидкости варьирует в пределах:

1) при поясничной пункции — 0,22—0,33 г/л;

2) при цистериальной пункции — 0,1—0,22 г/л;

3) при вентрикулярной пункции — 0,12—0,2 г/л.

Унифицированный метод определения белка с сульфациловой кислотой и сульфатом натрия. Интенсивность получения при коагуляции белка сульфациловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы.

1. 6%-ный раствор сульфациловой кислоты.

2. 14%-ный раствор безводного сульфата натрия.

3. Стандартный раствор альбумина — 1%-ный раствор: 1,0 мл альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствором хлорида натрия до метки. Реактив нестойкий. Для стабилизации к стандартному раствору прибавляют 1 мл 5%-ного раствора азидида натрия.


В этом случае при хранении в холодильнике реактив годен к употреблению в течение 2 месяцев.

4. 1 мл раствора альбумина.

5. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

Специальное оборудование: фотоэлектроколориметр.

Для анализа применяют свежеприготовленную смесь равных объемов 6%-ного раствора сульфациловой кислоты и 14%-ного раствора безводного сульфата натрия (рабочий раствор). В пробирку наливают 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл ликвора. Тщательно перемешивают. Через 10 мин интенсивность помутнения измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с длиной оптического пути 1 см против контроля, длина волны 410—480 нм (сине-фиолетовый светофильтр). В контроль вместо реактива берут 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика: из стандартного раствора готовят разведения и обрабатывают их, как опыт. В 5 пробирок наливают 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мл стандартного раствора альбумина и в каждую из них доливают до объема 10 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия.


Концентрация белка в этих растворах соответственно 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 г/л.

Примечания.

1. Если муть начинает оседать, перед измерением пробирку необходимо встряхнуть.

2. Перед определением целесообразно поставить реакцию Панди, и если результат реакции оценивают — 3+ или 4+, то перед началом количественного исследования ликвор надо развести изотоническим раствором хлорида натрия и при расчете учесть степень разведения.

3. Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л, поэтому при более высоких концентрациях белка ликвор следует разводить.

Повышенное содержание белка отмечают при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах, органических поражениях центральной нервной системы и оболочек мозга, при экстрамедуллярных опухолях спинного мозга. Пониженное содержание белка отмечается при гидроцефалии и повышенном образовании ликвора.

Большое практическое значение придается определению белкового индекса, отношению глобулинов к альбуминам. Белковые фракции определяются методом электрофореза.

Глобулиновые реакции
Унифицированный метод определения глобулинов осаждением карболовой кислотой (реакция Панди).


Реакция основана на осаждении глобулинов насыщенным раствором карболовой кислоты.

Необходимый реактив
Насыщенный раствор карболовой кислоты — 100 г карболовой кислоты растворяют в 1 л воды, встряхивают и оставляют в термостате при 37 °С на 6—8 ч. После пребывания при комнатной температуре в течение 7 дней надосадочную жидкость сливают и используют в качестве реактива.

Специальное оборудование: не требуется.

Ход исследования
На часовое стекло, положенное на черную бумагу, наливают 1 мл реактива и по краю наносят 1—2 капли ликвора.

Оценка результатов. В случае положительного результата в месте соприкосновения реактива с используемой спинномозговой жидкостью образуется молочно-белое облачко, переходящее в муть. Для обозначения результатов реакция Панди пользуются системой 4 плюсов:

1) слабая — 1+;

2) заметная опалесценция — 2+;

3) умеренное помутнение — 3+;

4) значительное помутнение — 4+.

Унифицированный метод определения глобулинов высаживанием (реакция Апельда).


Реакция основана на свойстве солей в определенной концентрации осаждать избирательно глобулины.

Необходимый реактив
Насыщенный раствор сульфата аммония — 85 г соли растворяют в 100 мл воды. Полученный раствор выдерживают 48 ч при комнатной температуре и после фильтрования употребляют для постановки реакции. Реакция раствора нейтральная.

Ход исследования
В пробирку вносят 0,5 мл ликвора, приливают 0,5 мл реактива и перемешивают. В контрольную пробирку наливают 1 мл воды.

Оценка результатов. Оценку проводят в течение 3 мин после смешивания ликвора с реактивом. Сравнение опыта с контролем производят на темном фоне.

Для выражения результатов пользуются системой 4 плюсов:

1) значительное помутнение — + + + +;

2) умеренное — + + +;

3) заметная опалесценция — + +;

4) слабая опалесценция — +.

Клиническое значение. Реакция дает относительное представление о нормальном и патологическом содержании глобулинов. Слабая опалесценция (+) свойственна и нормальной спинномозговой жидкости при небольшом повышении общего белка (больше 0,2 г/л).

Наиболее достоверное представление о содержании глобулинов можно получить при электрофоретическом обследовании ликвора, которое целесообразно проводить при положительной реакции Апельда.

Унифицированная реакция с хлорным золотом (реакция Ломге). Коллоидные растворы, не изменяющиеся под влиянием различных разведениий нормальной спинномозговой жидкости, в патологически измененной жидкости меняют степень дисперсности в зависимости от разведения жидкости, при этом изменяются цвет, растворимость и может выпадать осадок.

Необходимые реактивы

1. 1%-ный водный раствор чистого хлорного золота.

2. Хлорид натрия, 4,5 г на 1 л воды.

3. Цитрат натрия, 1%-ный раствор в воде.

4. Рабочий раствор хлорного золота.

Готовят следующим образом: к 95 мл воды приливают 1 мл 1%-ного хлорного золота, нагревают до 90—95 °С.

К рабочему раствору прибавляют 5 мл до появления вишнево-красного окрашивания. В процессе кипячения окраска раствора меняется, переходя из синей в фиолетовую, затем красную и вишневую. Раствор может храниться в темном месте до 2 месяцев.

Ход исследования
Готовят разведения спинномозговой жидкости. Берут 11 пробирок, в первую наливают 0,9 мл, а в остальные по 0,5 мл 0,45%-ного раствора хлорида натрия. В первую наливают 0,1 мм спинномозговой жидкости и после перемешивания переносят 0,5 мл во 2-ю пробирку, из последней 0,5 мл смеси удаляют. Таким образом исключают серию разведений от 1 : 10 до 1 : 5120. В 11-ю пробирку спинно-мозговую жидкость не добавляют, она является контрольной. Во все пробирки добавляют до 2,5 мл рабочего раствора хлорида натрия. После энергичного встряхивания пробирок их оставляют на 16—18 ч при комнатной температуре.

Оценка полученных результатов. Если спинно-мозговая жидкость нормальная, смесь всех 11 пробирок остается пурпурно-красной или в одной из первых пробирок фиолетово-пурпурной. При патологическом ликворе на дне пробирок появляется осадок и цвет жидкости меняется. Изменение цвета принято регистрировать цифрами:

0 — отсутствие окраски;

1 — красно-фиолетовый цвет;

2 — фиолетовый;

3 — красно-синий;

4 — синий;

5 — светло-синий и голубой;

6 — бесцветный.

Цифровое выражение по пробиркам: отрицательная реакция — 00 000 000 000; дегенеративная кривая — 666 654 320; воспалительная — 00 124 566 530.

Клиническое значение. При изменении альбуминно-глобулинового коэффициента происходит изменение коллоидной реакции. Воспалительный тип реакции Ломге наблюдается при повышенном содержании α- и b -глобулинов, дегенеративный тип реакции бывает за счет увеличения мелкодисперсной фракции белка — альбуминов и снижение содержания глобулинов.

Большое значение имеют глобулиновые реакции при дифференциальной диагностике органических и функциональных нарушений; при неврастении, прогрессивном параличе и латентном сифилисе.


Оцените статью: (12 голосов)
4.25 5 12
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.