Микроскопическое исследование

фото Микроскопическое исследование
Определение количества лейкоцитов. При помощи микроскопа и счетной камеры подсчитывают число лейкоцитов в ликворе после разрушения эритроцитов.

Необходимый реактив: 10%-ная уксусная кислота, подкрашенная метиловым фиолетовым, ледяной уксусной кислоты — 5 мл, воды — до 50 мл, метилового фиолетового — 0,1 мл.

Специальное оборудование: микроскоп, камера Фукса—Розенталя, смесители для подсчета лейкоцитов.

В меланжер для подсчета лейкоцитов набирают до метки “I” 10%-ной соляной кислоты, подкрашенной метиловым фиолетовым, до метки “II” набирают спинно-мозговую жидкость. Раствор уксусной кислоты гемолизирует эритроциты и подкрашивает в синий цвет лейкоциты, что облегчает их подсчет. После встряхивания запоминают содержание меланжера, предварительно выпустив первую каплю в камеру Фукса—Розенталя, которая состоит из 16 больших квадратов. Глубина камеры 0,2 мм, общий объем 3,1 мкл. При отсутствии смесителя допустимо смешивание ликвора с реактивом: на 10 капель ликвора 1 капля реактива. Лейкоциты считают во всех 256 квадратах и полученное число делят на 3,2 (объем камеры). Результат соответствует количеству форменных элементов в 1 мкл ликвора. Кроме этого, полученный результат необходимо разделить на 10 (степень разведения ликвора).

Нормальное содержание лейкоцитов в 3 мл спинномозговой жидкости следующее:

1) из желудочков мозга — 0—3 клетки;

2) субокципитальной пункции — 0—2 клетки;

3) люмбальной пункции — 7—10 клеток.

У детей цитоз выше, чем у взрослых, и с возрастом постепенно падает.


У ребенка до 3-х месяцев в 1 мл содержится 20—23 клетки, к 1 году — 14—15 клеток, к 10 годам — 4—5 клеток.

Повышенный цитоз наблюдают при воспалительных поражениях мозговых оболочек и органических поражениях вещества мозга.

Подсчет эритроцитов производится в камере Горяева или Фукс—Розенталя. Эритроциты могут быть обнаружены в прозрачной, бесцветной жидкости. При наличии 900—1000 эритроцитов в 1 мкл наблюдается помутнение жидкости, при наличии 2000 эритроцитов появляется розовое окрашивание, при наличии 4—5 тыс. эритроцитов жидкость приобретает геморрагический характер. Для диагностики внутричерепной геморрагии значение имеет не только абсолютное количество эритроцитов, но и нарастание их числа при повторном исследовании.

Дифференциация клеточных элементов в счетной камере. В счетной камере с сухой системой (окуляр 15ґ или 10ґ , объектив — 40ґ ) можно дифференцировать почти все элементы. Реактив окрашивает все ядра клеток в красновато-фиолетовый цвет, цитоплазма остается бесцветной. При этом обращают внимание на величину клеток, форму и расположение ядра, ядерно-цитоплазменное соотношение, наличие включений в цитоплазме. Этот метод используется наиболее часто.

Дифференциация клеточных элементов в окрашенных препаратах

Окраска по Розиной. Жидкость центрифугируют в течение 7—10 мин. Надосадок сливают легким покачиванием его по поверхности стекла, через 1—2 мин жидкость сливают. При небольшом лейкоцитозе (менее 50 мкл) осадок распределяют на участке 1 см2; при лейкоцитозе, превышающем 100 в 3 мкл, — на участке 1,5—2 см2; при лейкоцитозе 500 в 3 мкл — на участке 2—3 см2.


При очень большом лейкоцитозе осадок распределяют по всему предметному стеклу. Мазок высушивается в сушильном шкафу. Затем фиксируют метанолом в течение 1—2 мин и окрашивают по Романовскому: тонкий препарат с небольшим цитозом — 6—7 мин, с большим цитозом — 10—12 мин. Затем краску сливают, мазок промывают дистиллированной водой и высушивают. Если ядра имеют бледно-голубой цвет, мазок докрашивают еще в течение 1—2 мин.

Окраска по Везновой. Осадок выливают на стекло, слегка покачивая его, жидкость равномерно распределяют по поверхности. Мазок высушивают при комнатной температуре в течение суток, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 мин, покрывают специальными красителями, окрашивают в течение 1 ч. Если клетки бледны, докрашивают неразведанной краской под контролем микроскопии в течение 2—10 мин. Чем больше форменных элементов в ликворе, особенно при наличии крови, тем больше надо дополнительно окрашивать.

Окраска по Алексееву. На высохший, но не фиксированный препарат наносят 8—10 капель красителя по Романовскому. Той же пипеткой осторожно распределяют краску на весь препарат и оставляют на 30 сек. Затем добавляют на препарат 12—20 капель дистиллированной воды, нагретой до 40—60 °С. Соотношение капель краски и воды должно быть 1 : 2. Помешивают краску с водой и оставляют на 3 мин. Смывают краску струей дистиллированной воды, сушат препарат фильтровальной бумагой и микроскопируют. Метод применяется при срочном цитологическом исследовании.


Оцените статью: (9 голосов)
3.67 5 9
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.