Исследование с целью определения функционального состояния яичников

фото Исследование с целью определения функционального состояния яичников
Взятие материала производят из заднебокового свода влагалища. Материалом из заднего свода влагалища пользоваться не следует, так как в нем скапливаются ранее отторгнутые эпителиальные клетки. Содержимое насасывают стеклянной пипеткой с резиновым баллончиком. При необходимости получения большего количества материала содержимое можно брать гинекологической ложечкой. Материал, взятый ватным тампоном, для исследования непригоден.

Содержимое равномерно распределяют на предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе и окрашивают.

Окраска метиленовым синим
Необходимый реактив

1%-ный водный раствор метиленового синего.

Ход окраски
На высушенный препарат наносят 1—2 капли метиленового синего, покрывают покровным стеклом. Окрашивают в течение 1—2 мин. Затем мазок промывают дистиллированной водой следующим образом: у одного края покровного стекла наносят 1—2 капли дистиллированной воды, к противоположному краю прикладывают полоску фильтровальной бумаги. Таким образом препарат промывают несколько раз до получения бледно-синей окраски, затем высушивают.

Окраска фуксином

Необходимый реактив
3 г кислого фуксина растворяют в 100 мл 95°-ного спирта. К 12 мл этого раствора прибавляют 100 мл дистиллированной воды.

Ход окраски
На высушенный препарат наливают фуксин на 1 мин, затем смывают водой, высушивают. Таким же способом можно окрашивать мазки и метиленовым синим.

Окраска гематоксилин-эозином

Необходимые реактивы

1.


Смесь Никифорова.

2. Водный раствор гематоксилина (гематоксилин — 1 г, калийные квасцы — 50 г, йодистый натрий или калий — 0,2 г, дистиллированная вода — 1000 мл; раствор выдерживают на свету в течение 14 дней, после чего он готов к употреблению).

3. 1%-ный водный раствор эозина.

Ход окраски
Высушенные мазки фиксируют в смеси Никифорова (10—15 мин). Окрашивают водным раствором гематоксилина в течение 7—10 мин до слабо-фиолетового цвета. Промывают проточной водой. Окрашивают 1%-ным водным раствором эозина в течение 30 сек. Промывают проточной водой и высушивают.

Окраска по Романовскому

Необходимый реактив
В продаже имеется готовый раствор краски Романовского следующего состава: азур II — 3 г; эозин водорастворимый желтый — 0,8 г; метиловый спирт — 250 мл; глицерин — 250 мл.

В продаже имеется также сухая краска Романовского, из которой готовят раствор краски следующим образом: 3,8 г сухой краски Романовского растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта (последний хуже). Раствор оставляют на 3—5 суток, часто взбалтывая для лучшего растворения краски. Затем прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3—5 суток, периодически взбалтывая. Приготовленная таким образом краска хорошо сохраняется длительное время в темных бутылях в шкафу, где нет ни кислот, ни щелочей, без взбалтывания.

Вновь полученный или приготовленный раствор краски Романовского перед употреблением оттитровывают, т.е.


окрашивают несколько фиксированных мазков в течение 25—40 мин различно разведенной краской (1—2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). По хорошо окрашенному препарату устанавливают нужное количество капель краски на 1 мл и время окрашивания.

Ход окраски
Фиксированные мазки укладывают на мостик для окраски, представляющий собой стеклянные палочки, уложенные на два противоположных края кювета. Затем мазки заливают краской в разведении 1—2 капель на 1 мл дистиллированной воды. Краску наливают на мазок как можно более высоким слоем, и окрашивание длится в зависимости от температуры воздуха в помещении от 25 до 45 мин. Если температура в помещении низкая или требуется быстрее окрасить мазки, то разведенную краску можно подогревать до 60—70 °С (до кипения доводить нельзя).

После окончания окраски краску смывают (но не сливают) сильной струей воды и ставят мазки вертикально в деревянный штатив для просушивания. Разведенной краской можно пользоваться только в течение одного дня.

Окраска по Папаниколау

Необходимые реактивы

1. Смесь Никифорова.

2. Спирты 95, 90, 80, 70 и 50°.

3. Гематоксилин Гарриса.

4. 0,25%-ный раствор соляной кислоты.

5. Краска оранжевая Г.

6. Краска (ЕА-36).

7. Абсолютный спирт.

8. Ксилол.

9. Канадский бальзам.

Приготовление гематоксилина Гарриса
1 г гематоксилина растворяют в 10 мл абсолютного спирта, 20 г калийных квацов растворяют при нагревании в 200 мл дистиллированной воды.


Через 24 ч оба раствора соединяют и прибавляют 0,5 г красной или желтой окиси ртути. Раствор нагревают до кипения, остужают и через 24 ч фильтруют.

Приготовление раствора краски оранжевая Г
К 100 мл 0,5%-ного спиртового раствора оранжевой краски Г добавляют 0,015 г фосфорно-вольфрамовой кислоты.

Приготовление составной краски (ЕА-36)
45 мл 0,5%-ного спиртового раствора светлой зеленой, 10 мл 0,5%-ного спиртового раствора бисмаркбраун, 45 мл 0,5%-ного спиртового раствора эозина желтоватого (водо- и спирторастворимого), 0,2 г фосфорновольфрамовой кислоты, капля насыщенного водного раствора углекислого лития.

Ход окраски
Мазки после фиксации проводят последовательно через сосуды, содержащие 80, 70 и 50° спирты и дистиллированную воду. Затем 6 мин гематоксилином Гарриса, осторожно споласкивают дистиллированной водой и погружают (6 раз) в 0,25%-ный раствор соляной кислоты. Далее на 6 минут кладут в сосуд с проточной водопроводной водой и обмывают дистиллированной водой. Затем проводят через 50, 70, 80 и 95° спирты. Обезвоженные таким образом препараты окрашивают в течение 1,5 мин краской оранжевой Г, споласкивают в двух сменах 95° спирта и красят в течение 1,5 мин составной краской (ЕА-36). Мазки отмывают от избытка краски в трех сменах 95° спирта. Далее препараты просветляют проведением через абсолютный спирт, через смесь абсолютного спирта и ксилола в равных объемах и, наконец, через ксилол, после чего заключают в канадский бальзам.

Из приведенных выше окрасок самые простые — окраска фуксином и метиленовым синим, но эти окраски не дают полного представления обо всей цитологической картине.


Метод Папаниколау сложен, требует много дефицитных и дорогостоящих реактивов, поэтому реже используется в практической работе лабораторий. Окраска по Романовскому вполне пригодна для цитологического исследования влагалищных мазков и выгодно отличается тем, что может применяться в любой лаборатории.

Клеточный состав влагалищного мазка

В мазках из влагалища различают 4 вида клеток плоского эпителия.

1. Клетки поверхностные большие (35—55 мк), полигональной формы, ядро маленькое (6 мк), пикнотичное. Клетки чаще располагаются раздельно. Цитоплазма клеток очень слабо окрашивается, ядро темное. В большом количестве встречаются главным образом с 9 по 14-й день менструального цикла.

2. Промежуточные клетки большие (25—30 мк), форма неправильная, ядро более крупное, круглое или овальное. Клетки часто располагаются пластами. Цитоплазма окрашивается интенсивнее, чем у поверхностных клеток, ядро более светлое. Встречаются во всех фазах менструально-овариального цикла.

3. Парабазальные клетки — меньших размеров, круглой или овальной формы, с большим круглым ядром. Диаметр ядра немного меньше, чем ширина ободка цитоплазмы. Окрашиваются чаще в базофильные тона. Иногда морфологические черты парабазальных клеток неясно отличимы от клеток базальных.

4. Клетки базальные (или атрофические) — округлой формы, несколько меньших размеров, чем парабазальные, ядро круглое, большое, занимает большую часть клетки.


Цитоплазма окрашивается в интенсивные базофильные тона (некоторые авторы называют клетки с такой морфологией парабазально-базальными). Клетки встречаются во время менопаузы и единичные во время менструаций и после родов.

Слизистая оболочка влагалища в норме выстлана многослойным плоским эпителием. В зависимости от соотношения клеток разных слоев эпителия в мазках различают 4 типа клеточных реакций, которые позволяют судить о функциональном состоянии яичников.

1. Много базальных клеток и большое количество лейкоцитов. Этот тип мазка указывает на резкую недостаточность гормонов яичников (эстрогенов).

2. В мазке значительное количество базальных клеток, довольно много промежуточных, значительное количество лейкоцитов. Соответствует умеренно выраженной недостаточности гормонов.

3. В мазке преобладают промежуточные клетки, иногда нечетко контурированные, могут лежать пластами. Базальных клеток немного. Такая картина мазка указывает на легкую степень недостаточности эстрогенов.

4. Мазок состоит из поверхностных клеток. Такой тип мазка соответствует достаточной секреции эстрогенов.

Исследование влагалищного мазка нельзя производить при наличии воспалительных процессов (выделений), после влагалищных манипуляций, при внутривлагалищном применении медикаментов. После полового сношения мазки берут не раньше чем через 24 ч.

Тест влагалищного мазка применяется для установления показаний и контроля над результатами гормонотерапии. У женщин с нормальным овариально-менструальным циклом картина влагалищных мазков в зависимости от фазы цикла может быть третьей или четвертой (фаза пролиферации — третий тип реакции, в период овуляции и в ближайшие дни после нее — третий или четвертый).

Для решения вопроса о функциональном состоянии яичников применяют ряд цитохимических (определение гликогена и ферментов в клетках) и биохимических методов (определение ферментов во влагалищном содержимом, кислотности, молочной кислоты и др.).

Для исследования влагалищных мазков также используется люминесцентная и фазовоконтрастная микроскопия, данные которой дополняют трактовку функционального состояния яичников. Для более правильной оценки влагалищного мазка, кроме вида клеток и их количества, учитывают так называемые индексы; наибольшее значение они имеют для суждения о нарушении функции яичников. К таким индексам относятся:

1) кариопикнотический индекс — отношение числа поверхностных клеток с пикнотическими ядрами к общему числу клеток мазка;

2) атрофический индекс (индекс глубоких клеток) — отношение числа базальных и парабазальных клеток к общему числу клеток мазка;

3) индекс промежуточных клеток — отношение числа промежуточных клеток к общему числу клеток мазка;

4) эозинофильный индекс — отношение числа ацидофильных поверхностных клеток к общему числу базофильных поверхностных клеток.

Все индексы выражаются в процентах.


Оцените статью: (13 голосов)
3.62 5 13
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.