Определение крови и кровяных пигментов

Кровь можно обнаружить в моче микроскопически (см. “Микроскопия осадка мочи”) и с помощью химических реакций.

Химические реакции на кровь
Принцип методов
Каталитическое свойство гемоглобина и окисление веществ в присутствии окислителей (перекись водорода, азонированный скипидар и др.) с образованием цветной реакции.

Бензидиновая проба
Необходимые реактивы
1. Основной бензидин.
2. Раствор уксусной кислоты 50%-ный, перед употреблением немного бензидина (на кончике ножа) растворяют в 5 мл уксусной кислоты.
3. Раствор перекиси водорода 3%-ный или (лучше) пергидроль, разведенный в 10 раз.

Ход исследования
К 3—5 мл мочи добавляют 2—3 капли раствора бензидина в уксусной кислоте и столько же перекиси водорода, перемешивают. Положительная реакция на кровь дает зеленое или сине-зеленое окрашивание в течение первых 2 мин. Окрашивание, наступившее после 2 мин, не учитывается.
Вместо перекиси водорода можно пользоваться перекисью бария. 0,025 г основного бензидина и 0,1 г перекиси бария растворяют в 5 мл 50%-ной уксусной кислоты.


Реактив готовят непосредственно перед употреблением.

Ход исследования
К 3—5 мл мочи добавляют 2—4 капли реактива, отмечают изменение цвета в первые 2 мин. В положительном случае появляется сине-зеленое окрашивание.
Бензидииовая проба считается наиболее чувствительной.

Проба с гваяковой смолой (Вебера ван Деена)
Необходимые реактивы
1. Ледяная или 80%-ная уксусная кислота.
2. Спирт 96°.
3. Эфир.
4. Свежеприготовленная гваяковая настойка: растертую в порошок гваяковую смолу, взятую на кончике ножа, всыпают в сухую пробирку, приливают 2—6 мл спирта, дают отстояться, для реакции берут отстоявшуюся жидкость без осадка.
5. 3%-ная перекись водорода.
6. Хлороформ.

Ход исследования
3—5 мл мочи разводят уксусной кислотой и приливают равное количество эфира, тщательно размешивают и сливают в пробирку. Дают отстояться. Эфирный слой переносят в другую чистую пробирку, приливают 15—20 капель гваяковой настойки, 10—15 капель перекиси водорода. При наличии крови тотчас или через 1—3 мин появляется синее или фиолетовое окрашивание.

Упрощенная гваяковая проба
Небольшое количество мочи наносят на бумажный фильтр, положенный на чашку Петри.


На него накапывают поровну (по 2—3 капли) уксусной кислоты, гваяковой настойки и перекиси водорода. В присутствии крови появляется сине-зеленое окрашивание.

Пирамидоновая проба
Необходимые реактивы
1. 5%-ный спиртовой раствор пирамидона (амидопирина).
2. 30%-ный раствор уксусной кислоты.
3. Перекись водорода.

Ход исследования
Берут равные количества мочи и раствора пирамидона (по 2—3 мл), прибавляют по 10—12 капель уксусной кислоты и перекиси водорода. В присутствии крови появляется сине-фиолетовое окрашивание. Интенсивность и время появления окраски зависят от количества крови. Отрицательный ответ дается через 2—3 мин.

Определение гемоглобина
Для диагноза гемоглобинурии необходимо доказать наличие гемоглобина в моче одной из химических проб. При отсутствии эритроцитов в осадке (при микроскопическом исследовании) желательно спектроскопически определить природу пигмента.

Определение гемосидерина. Реакция на берлинскую лазурь
Необходимые реактивы
1. 5%-ный раствор соляной кислоты.
2.


2—5%-ный водный раствор железисто-синеродистого калия (желтая кровяная соль).

Ход исследования
Центрифугируют 15 мл мочи. К осадку прибавляют несколько капель соляной кислоты и несколько капель железисто-синеродистого калия. Делают препарат и микроскопируют. Через 2—5 мин (возможно и раньше) в клетках в положительном случае видны сине-зеленые зернышки. При разрушении клеток гемосидерин лежит свободно.
Гемосидерин в моче встречается главным образом при гемолитических анемиях с внутрисосудистым гемолизом (болезнь Маркиафава—Микели и др.).


Оцените статью: (11 голосов)
3.64 5 11
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.