Определение порфобилиногена

фото Определение порфобилиногена
Унифицированный метод с пара-диметиламинобензальдегидом

Принцип метода
Порфобилиноген (ПБГ) реагирует с пара-диметиламинобензальдегидом с образованием окрашенного в красный цвет соединения. Для повышения специфичности реакции добавляют ацетат натрия. Соединения, дающие аналогичную реакцию с пара-диметиламинобензальдегидом (уробилиноген, производные индола, скатола и др.), удаляют путем экстракции хлороформом и бутанолом, в которых ПБГ нерастворим.

Необходимые реактивы
1. 4-(диметиламино)-бензальдегид (пара-диметиламинобензальдегид).
2. Соляная кислота концентрированная.
3. Реактив Эрлиха: 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной НСl, приливают к 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтым. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стабилен.
4. Натрия ацетат, насыщенный раствор: 375 г CH3COONa ґ 3Н2О (или 226 г CH3COONa) растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды, охлаждают до комнатной температуры. Хранят при температуре 20 °С. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным.
5. Хлороформ.
6. Бутиловый спирт.
7. Бумага индикаторная для измерения рН (в интервале 4,0—5,0).

Ход исследования
Исследуют мочу в первые 2—3 ч после мочеиспускания. Смешивают в пробирке 2,5 мл реактива Эрлиха и 2,5 мл мочи. Добавляют 5 мл насыщенного раствора ацетата натрия и перемешивают.


Измеряют рН индикаторной бумагой; рН должен быть в интервале 4,0—5,0. Если рН меньше 4,0, то добавляют раствор ацетата натрия до установления нужного рН. Если окраска не развивается, результат считают отрицательным. При развитии розовой или красной окраски к пробе добавляют 5 мл хлороформа и встряхивают. Если окраска переходит в слой хлороформа, а верхний слой остается бесцветным или слегка желтоватым, то результат следует считать отрицательным. Если окраска остается в слое над хлороформом, то 6—8 мл из окрашенного слоя переносят в другую пробирку, добавляют бутиловый спирт в соотношении 1 : 2 и встряхивают. Если фазы не сразу разделяются, то смесь центрифугируют при переходе окраски в слой бутилового спирта — результат отрицательный, если же окраска остается в исследуемом слое, то в исследуемой моче концентрация ПБГ превышает нормальную.

Если концентрация ПБГ в моче нормальна (до 2 мг/л), то проба отрицательная. ПБГ данным методом обнаруживают при концентрации выше 6 мг/л.

При хранении мочи более 3 ч при комнатной температуре положительная реакция может стать отрицательной. Это можно объяснить превращением порфобилиногена в порфирин и образованием ингибиторов реакции. Если нет возможности исследовать мочу в первые 2 ч, то хранить ее надо в холодильнике при 4 °С, доведя рН мочи до 6,0—7,0, так как в этих условиях порфобилиноген стабилен длительное время.


Оцените статью: (10 голосов)
3.7 5 10
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.