Определение содержания уробилиноидов

фото Определение содержания уробилиноидов
В моче здорового человека содержатся следы уробилиногена, а за сутки выделяется не больше 6 мг, у детей — не более 2 мг.

В свежевыпущенной моче содержится уробилиноген, который при стоянии мочи окисляется в уробилины. Все эти вещества являются производными билирубина и называются уробилиноидами. Уробилиноиды образуются под действием ферментов бактерий и клеток слизистой оболочки кишечника из билирубина, выделившегося с желчью.

Определение уробилина имеет большое клиническое значение. Присутствие его в количествах, превышающих норму, может быть при гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, некоторые инфекции, например, малярия и др.), при заболевании печени (гепатиты, цирроз печени, отравления и пр.), при кишечных заболеваниях и лихорадочных состояниях, что связано с токсическим поражением печени. Большое диагностическое значение имеет исследование уробилина в моче при желтухах. Полное отсутствие уробилина указывает на обтурационную желтуху. Повышение содержания уробилина обнаруживается при паренхиматозной и гемолитической формах желтух.

Проба Шлезингера

Принцип метода
Появление флюоресценции уробилина за счет образовавшихся цинкуробилиновых комплексов.

Необходимые реактивы
1.


Насыщенный спиртовой раствор ацетата цинка (10 г на 100 мл 96° спирта).
2. Раствор Люголя.

Ход исследования
К 4—5 мл мочи приливают равное количество реактива (реактив предварительно взбалтывают) и 1 каплю раствора Люголя. Оставляют на 10 мин, затем фильтруют. Пробирку просматривают на темном фоне в отраженном свете. При наличии уробилина образуется зеленая флюоресценция. Некоторые медикаменты, например атебрин, дают положительную пробу Шлезингера. Для разграничения настоящей положительной пробы и медикаментозной прибавляют разведенную соляную или серную кислоту. Флюоресценция, вызванная уробилином, исчезает, медикаментозная остается.

Унифицированная проба Флоранса

Принцип метода
С НСl уробилин образует соединение, окрашенное в красный цвет.

Необходимые реактивы
1. Серная кислота концентрированная.
2. Диэтиловый эфир.
3. НСl концентрированная.

Ход исследования
Мочу в количестве 8—10 мл подкисляют в пробирке 8—10 каплями концентрированной серной кислоты, перемешивают, затем приливают 2—3 мл эфира и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз осторожно пропускают эфир через слой мочи для экстрагирования уробилина.


Затем эфирную вытяжку мочи наслаивают, лучше пастеровской пипеткой, на 2—3 мл концентрированной НСl, налитой в другую пробирку. При наличии уробилина на границе жидкостей образуется розовое кольцо. Интенсивность окраски пропорциональна количеству уробилина.

Проба настолько чувствительна, что даже в норме на границе между двумя жидкостями видно легкое розовое окрашивание. Этой пробой можно установить полное отсутствие уробилиноидов в моче.

Унифицированная проба Богомолова

Принцип метода
Уробилин с сульфатом меди образует соединение красно-розового цвета.

Необходимые реактивы
1. Меди сульфат, насыщенный раствор: 23 г CuSO4 ∙ 5H2O растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
2. Хлороформ.

Ход исследования
К 10—15 мл мочи приливают 2—3 мл насыщенного раствора сульфата меди. Если образуется помутнение, то прибавляют несколько капель концентрированной НСl до прояснения раствора. Через 5 мин приливают 2—3 мл хлороформа и, закрыв пробирку пробкой, несколько раз встряхивают.
Если хлороформ окрашивается в розовый цвет, то концентрация уробилина в моче выше нормальной.

Унифицированная бензальдегидная проба Нейбауэра
Проба основана на том, что уробилиногеновые тела с пара-диметиламинобензальдегидом (реактив Эрлиха) дают соединение красной окраски.

Необходимый реактив
Реактив Эрлиха — 2 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 100 мл 20%-ного раствора соляной кислоты.

Ход исследования
К 3—4 мл свежевыпущенной мочи, охлажденной до комнатной температуры, прибавляют 3—4 капли реактива Эрлиха (1 каплю на 1 мл мочи).


Окрашивание жидкости в красный цвет в течение первых 30 сек. говорит об увеличенном содержании уробилиногена в моче; если окрашивание развивается по прошествии 30 сек., то концентрация уробилина в моче нормальная, а если через 30 сек. окраска не развивается, то это может быть вариантом нормы или можно говорить о полном отсутствии уробилиногена в моче.

Билирубин мешает определению уробилиноидов, поэтому, если он обнаружен в моче, его следует предварительно удалить, осаждая хлоридом бария с последующим фильтрованием. Для этого к 10—12 мл мочи приливают 5—6 мл 10%-ного раствора ВаСl2 и фильтруют. Затем фильтрат проверяют на полноту осаждения билирубина и процедуру повторяют, если первое осаждение было неполным.

Унифицированный метод с пара-диметиламинобензальдегидом

Принцип метода
Уробилиноген с пара-диметиламинобензальдегидом образует комплекс, окрашенный в красный цвет; интенсивность окраски пропорциональна содержанию уробилиногена. Для восстановления уробилина в уробилиноген используют аскорбиновую кислоту и гидрат окиси железа. Для увеличения специфичности реакции добавляют ацетат натрия.

Необходимые реактивы
1. 4-диметиламинобензальдегид (пара-диметиламинобензальдегид).
2. НСl концентрированная; реактив Эрлиха: 0,7 г пара-диметиламинобензальдегида растворяют в 150 мл концентрированной НСl, приливают к 100 мл дистиллированной воды и смешивают. Раствор должен быть бесцветным или слегка желтоватым. Хранят в посуде из темного стекла. Реактив стабилен.
3. Натрия ацетат, насыщенный раствор: 375 г CH3COONa ґ 3H2O (или 226 г CH3COONa) растворяют в 250 мл теплой дистиллированной воды, охлаждают до комнатной температуры. Хранят при температуре 20 °С. Раствор должен быть бесцветным и прозрачным.
4. Аскорбиновая кислота.
5. Натр едкий: 0,5 г/л раствора.
6. Бария хлорид, 100 г/л раствора.
7. Фенолсульфофталеин (феноловый красный). Используют для приготовления калибровочного раствора.
8. Основной калибровочный раствор: 20 мг фенолсульфофталеина растворяют в 100 мл 0,5 г/л раствора едкого натра. Стабилен при хранении. Рабочий калибровочный раствор готовят разведением основного раствора 0,5 г/л раствором едкого натра в 100 раз. Стабилен в течение недели с условием хранения при 20 °С. Рабочий раствор содержит 0,2 мг фенолсульфофталеина в 100 мл и эквивалентен по окраске раствору уробилиногена — 0,345 мг на 100 мл. Точность приготовления можно проверить измерением оптической плотности раствора на спектрофотометре: при длине волны 562 нм оптическая плотность раствора должна быть 0,380—0,390.

Специальное оборудование — фотоэлектроколориметр или спектрофотометр.

Исследование проводят в первые 2—3 ч после мочеиспускания. При наличии мутности мочу центрифугируют, а затем проводят качественное определение билирубина. Если обнаруживают билирубин, то 8 мл мочи смешивают с 2 мл 100 г/л раствора хлорида бария и фильтруют через бумажный фильтр. Конечный результат умножают на 1,25, чтобы внести поправку на разведение.

Ход исследования
100 мг аскорбиновой кислоты растворяют в 10 мл исследуемой мочи и помещают по 1,5 мл в 2 пробирки для опытной и холостой пробы. В пробирку с холостой пробой прибавляют 4,5 мл свежеприготовленной смеси одного объема раствора Эрлиха и двух объемов насыщенного раствора ацетата натрия. В пробирку с опытной пробой прибавляют 1,5 мл раствора Эрлиха и немедленно приливают 3 мл насыщенного раствора ацетата натрия. Через 5 мин измеряют экстинкцию обеих проб против воды на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—590 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 1 см, на спектрофотометре при длине волны 562 нм. Рабочий калибровочный раствор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Результаты выражают в единицах Эрлиха (1 ед. соответствует 1 мг уробилиногена). Концентрацию уробилиногена выражают количеством единиц Эрлиха в 100 мл мочи (Едэ).

Расчет производят по формуле:

Едэ = Е0 – Еx/Ек ґ 0,346 ґ 6,0 / 1,5 = Е0 – Еx/Ек ґ 1,38,
где Ео — экстинкция опытной пробы;
Ех — экстинкция холостой пробы;
Ек — экстинкция калибровочной пробы;
0,346 — концентрация уробилиногена в растворе (0,346 мг на 100 мл), окраска которого эквивалентна окраске калибровочного раствора фенолфталеина;
6,0 — объем пробы, мл;
1,5 — количество мочи в пробе, мл.

Рекомендуется собирать мочу в посуду из темного стекла, так как при дневном свете окисление уробилиногена происходит значительно быстрее.
Для расчета выделения уробилиногена за определенное время для исследования надо брать мочу из всего собранного за это время объема и, учитывая его, провести расчеты по формуле:
Е0 – Еx / Ек ґ 1,38 ґ V / 100,
где V — объем мочи, мл, выделенный за определенный промежуток времени;
1/100 — коэффициент для расчета количества уробилиногена в 1 мл мочи.


Оцените статью: (6 голосов)
3.83 5 6

Cтатьи из раздела Лабораторные исследования:


Бактериоскопическое исследование мочи с целью обнаружения туберкулезных микобактерий
Исследование мочевых камней
Исследование мочи на опухолевые клетки
Исследование осадка мочи
Исследование физических свойств мочи
Исследование химических свойств мочи
Качественные методы исследования анализов мочи
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.