Химическое исследование желчи

фото Химическое исследование желчи
Химическое исследование желчи включает определение концентрации билирубина, холестерина и желчных кислот, вычисление холато-холестеринового индекса (х/х) и др.

Колориметрическим методом по Мейленграхту можно ориентировочно определить концентрацию билирубина. При взаимодействии сульфаниловой кислоты с нитритом натрия образуется диазофенилсульфоновая кислота (диазосмесь), которая дает со связанным (прямым) билирубином сыворотки розово-фиолетовое окрашивание. По его интенсивности судят о концентрации связанного билирубина, дающего прямую реакцию. При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива несвязанный (непрямой) билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние и также дает розово-фиолетовое окрашивание с диазосмесью одновременно с прямым билирубином. По интенсивности окраски, образующейся после добавления кофеинового реактива, определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между общим и связанным (прямым) билирубином находят содержание несвязанного (непрямого) билирубина.

В 3 пробирки (для общего билирубина, прямого и для контроля) вводят реактивы в порядке, указанном в табл.


25.

Для определения прямого билирубина в пробе измерения на ФЭКе производят спустя 5—10 мин после добавления диазосмеси, так как при более длительном стоянии в реакцию вступает непрямой билирубин.

При определении общего билирубина пробу оставляют стоять 20 мин. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.

Контроль на мутность сыворотки ставят для каждого опыта.

Измерение экстинкции производят на ФЭКе при зеленом светофильтре (500—560 нм) против воды в кювете с толщиной слоя в 5 мм. Из показателей общего и прямого билирубина вычитают показатель контроля. Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и прямого билирубина. Для определения непрямого билирубина из общего вычитают прямой билирубин.

Построение калибровочного графика удобно производить с помощью набора “Билирубин-эталон” (фирма “Лахема”, Чехия). Набор содержит лиофилизированный (сухой) билирубин, альбумин и инструкцию по построению графика.

Результаты выражают в миллиграммах на литр. Для этого концентрацию билирубина, найденную по графику, умножают на 2000, так как для исследования было взято 0,5 мл сыворотки.


Коэффициент пересчета в единицы СИ (мкмоль/л) равен 1,7104. В норме содержание общего билирубина — 8,5—20,5 мкмоль/л.

По соотношению концентрации билирубина в порциях С и В судят о концентрационной способности желчного пузыря (с учетом возможности снижения ее в порции В при разведении желчи воспалительным экссудатом). В норме в порции В содержится 3,4—6,8 ммоль/л (200—400 мг%), а в порции С — 0,17—0,34 ммоль/л (10—20 мг%) билирубина.

Цветная реакция Либермана и Бурхарда. С помощью этого метода производят количественное определение холестерина в желчи. Холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот дает зеленое окрашивание.

Для этого используют:

1) смесь из 1 части ледяной уксусной кислоты, 5 частей уксусного ангидрида и 1 части концентрированной серной кислоты; смесь должна быть бесцветной или желтоватой; хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике;

2) стандартный раствор холестерина — 1800 мг/л (180 мг холестерина растворяют в 2,5 мл хлороформа в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят до метки абсолютным спиртом); раствор хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой, которую парафинируют; 1 мл раствора содержит 1,8 мг холестерина.

К 2,1 мл смеси реактивов добавляют 0,1 мл исследуемого материала (желчи).


Пробирку энергично встряхивают 10—12 раз и ставят в термостат на 10 мин при температуре 37 °С. Измерения производят на ФЭКе против реактива 1 при красном светофильтре (630—690 нм) в кювете с толщиной слоя в 5 мм.

Расчет ведут по калибровочному графику.

Для калибровочного графика готовят из основного стандартного раствора холестерина ряд разведений.

Рабочие стандартные растворы обрабатывают так же, как опытные пробы.

Известен ряд колориметрических методов на желчные кислоты, в которых используются реакция Петтенкофера и ее модификации, основанные на взаимодействии желчных кислот с сахаром в присутствии серной кислоты. В результате реакции образуется фурфурол и раствор окрашивается в вишнево-красный цвет. Эта реакция специфична для холевой и парных (гликохолевой и таурохолевой) кислот, остальные желчные кислоты не вступают в данную реакцию.

В норме согласно И.А. Скуя в порции А концентрация холестерина составляет 1,3—2,8 ммоль/л (50—110 мг%), холатов — 17,4—52,0 ммоль/л (670—2000 мг%); в порции В концентрация холестерина — 5,2—15,6 ммоль/л (200—600 мг%), холатов — 57,2—184,6 ммоль/л (2200—7100 мг%); в порции С содержание холестерина 1,1—3,1 ммоль/л (45—120 мг%), холатов — 13,0—57,2 ммоль/л (500—2200 мг%). Приведенные нормативы показывают большие физиологические колебания состава желчи. Н.А. Скуя предлагает считать гиперхолестеринохолией концентрацию холестерина выше 6,5 ммоль/л (250 мг%) в одной или нескольких печеночных (порции А и С) фракциях, а гипохолестеринохолией — концентрацию холестерина менее 2—2,6 ммоль/л (80—100 мг%) во всех печеночных фракциях.

Особое практическое значение имеет холато-холестериновый коэффициент (х/х). У здоровых лиц он обычно выше 10. Снижение х/х коэффициента (менее 10) является индикатором склонности к камнеобразованию в желчевыводящей системе При оценке х/х коэффициента необходимо сопоставлять с данными микроскопического анализа (обнаружения скоплений кристаллов холестерина, аморфных масс билирубината кальция, микролитов).


Оцените статью: (10 голосов)
3.8 5 10

Cтатьи из раздела Лабораторные исследования:


Изменения содержимого двенадцатиперстной кишки при патологии
Микроскопическое исследование прямой кишки
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.