Унифицированный метод фотометрии пламени. Определение в сыворотке и плазме крови

фото Унифицированный метод фотометрии пламени. Определение в сыворотке и плазме крови
Принцип метода.Разведенная водой плазма или сыворотка крови распыляется и в виде мельчайших капелек с током воздуха поступает в пламя газовой горелки, которому калий придает слабое красно-фиолетовое, а натрий ярко-желтое окрашивание. Интенсивность окраски измеряется фотоэлементом. В связи с тем, что концентрация калия в плазме невелика, при его определении калибровочный раствор должен содержать также соли натрия, а при некоторых конструкциях прибора — и соли кальция. Натрия в плазме много и он ярко окрашивает пламя, поэтому калибровочный раствор может содержать только соли натрия.

Приготовление калибровочных растворов
Есть два способа приготовления калибровочных растворов. В первом случае сначала готовят серию основных калибровочных растворов, концентрации электролитов в которых перекрывают возможный диапазон колебаний состава плазмы, а затем эти растворы разводят так же, как и исследуемую плазму. Этот способ позволяет в максимальной степени избежать погрешностей, связанных с неточностями пипеток, используемых при разведении, но необходим двойной набор посуды — для основных и рабочих растворов.


В другом случае сразу готовят рабочие калибровочные растворы, которые имитируют состав разведенной для сжигания плазмы; такой раствор может быть использован лишь в том случае, если плазма всегда разводится совершенно одинаково. Считают, что первый более подходит для лабораторий, где электролиты определяются не очень часто, второй — для лабораторий, где проводится много определений и методику можно считать хорошо налаженной.

При приготовлении калибровочных растворов используют соли натрия, калия и кальция, высушенные в сушильном шкафу при температуре 100—120 °С.

1. Натрия хлорид. Исходный калибровочный раствор, содержащий 1000 ммоль/л. Готовят, растворяя 11,69 г NaCl (поваренной соли) в воде и доводя объем до 200 мл.

2. Калия хлорид. Исходный калибровочный раствор с концентрацией 100 ммоль/л. Готовят, растворяя 0,746 г КСl в воде и доводя объем до 100 мл.

3. Кальция карбонат. Исходный калибровочный раствор, содержащий 100 ммоль/л. Готовят, растворяя 1,001 г СаСО3 (кальция карбоната) в 1 н НСl и доводя объем до 100 мл той же кислотой.

4.


Основной калибровочный раствор для определения калия готовят из исходных калибровочных растворов.

При построении калибровочного графика из основного калибровочного раствора готовят рабочие калибровочные растворы путем разведения водой во столько же раз, во сколько разводят и исследуемую плазму или сыворотку, желательно с использованием тех же пипеток, дозаторов и мерных колб.

5. Если чувствительность пламенного фотометра такова, что исследуемую плазму крови для определения надо разводить в 20 раз, рабочие калибровочные растворы для определения калия могут быть приготовлены также более простым способом. Для этого в мерную колбу вместимостью 1 л вносят 7 мл исходного калибровочного раствора NaCl с концентрацией 1000 ммоль/л и 2,5 мл исходного раствора СаСО3 с концентрацией 100 ммоль/л и доводят объем водой до 1 л. Получают фоновый раствор с концентрацией натрия и кальция 7 и 0,25 ммоль/л. Готовят также калибровочный раствор калия с содержанием 5 ммоль/л, для чего исходный раствор с концентрацией 100 ммоль/л разводят водой в 20 раз в мерной колбе вместимостью 100 мл.


Смешивают оба раствора.

6. Основной калибровочный раствор для определения натрия готовят, помещая в мерную колбу вместимостью 100 мл 12—18 мл исходного раствора с концентрацией Na 1000 ммоль/л, затем доводят водой до метки. Получается серия основных калибровочных растворов, которые содержат натрий в концентрациях от 120 до 180 ммоль/л. Для построения калибровочного графика каждый из этих растворов разводят в 100 раз, желательно с помощью тех же пипеток или дозаторов и мерных колб, которые используются при разведении исследуемого материала.

7. Рабочий калибровочный раствор для определения натрия в плазме крови можно приготовить также по следующей прописи: 2 мл исходного калибровочного раствора с содержанием натрия 1000 ммоль/л вносят в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят до метки водой. Из этого раствора, содержащего 10 ммоль/л, берут по 12—18 мл и вносят в мерные колбы вместимостью 100 мл и доводят водой до метки. Получается серия растворов, содержащих натрий в концентрациях от 1,2 до 1,8 ммоль/л, т.е. в таких, которые соответствуют содержанию натрия в плазме крови от 120 до 180 ммоль/л, при условии, что исследуемый материал разводился перед определением в 100 раз.

Ход исследования. При определении калия в плазме крови очень важно, чтобы не было гемолиза, так как эритроциты значительно богаче этим элементом, чем плазма, и разрушение даже небольшого их количества приводит к завышенным результатам. Если есть хоть малейшее сомнение в том, что эритроциты удалены полностью, плазму или сыворотку надо повторно центрифугировать. В связи с тем, что калий, хотя и медленно, но выходит из эритроцитов через неповрежденную мембрану, предпочтительнее использовать для исследования плазму, которую получают центрифугированием в течение 15 мин при скорости 3000 об./мин не позднее чем через 45—60 мин после взятия крови.

Обычно для определения калия исследуемую плазму разводят водой в 20 раз, а для определения натрия в 100 раз, но разведения могут быть и другими в зависимости от чувствительности прибора. Определение начинают с того, что сжигают серию калибровочных растворов, затем исследуемые пробы и снова калибровочные растворы, определение считают успешным, если калибровка, полученная в начале, совпадает с полученной в конце.

Результаты рассчитывают по калибровочному графику. После окончания анализа надо с особой тщательностью промыть и просушить распылитель согласно заводской инструкции. Это очень ответственная и легко повреждаемая деталь прибора, коррозия которой или засорение делает невозможным выполнение анализа.

Содержание натрия в плазме крови определяют так же, как и содержание калия, с той разницей, что исследуемый материал разводят, как правило, в 100 раз и используют калибровочный раствор для определения натрия.


Оцените статью: (7 голосов)
3.71 5 7

Cтатьи из раздела Лабораторные исследования:


Железо
Йод
Кальций
Магний
Медь
Метод определения кальция по цветной реакции с глиоксаль-бис-2-оксианилом
Метод определения кальция по цветной реакции с мурексидом в присутствии глицерина
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.