Определение активности γ-глутамилтранспептидазы (ГГТП)

фото Определение активности γ-глутамилтранспептидазы (ГГТП)
ГГТП катализирует перенос γ-глутамила с глутатиона на аминокислоту или пептид. Фермент занимает важное место в метаболизме аминокислот. В почках фермент играет главную роль в реабсорбции аминокислот из первичной мочи.

ГГТП располагается в основном на мембранах клеток, обладающих высокой секреторной активностью, — эпителиальных клеток, выстилающих желчные пути, печеночные канальца, проксимальные канальца нефрона, панкреатическая экзокринная ткань, выводные протоки, ворсинчатые клетки тонкой кишки. В порядке снижения активности ГГТП ткани располагаются почки, печень, поджелудочная железа, щеточная кайма клеток тонкой кишки. Предполагают, что в печени ГГТП связывает молекулы веществ, которые необходимо экскретировать.

Повышение активности ГГТП сопровождает все заболевания печени. Наиболее часто увеличение активности ГГТП при заболеваниях печени и желчевыводящих путей считают результатом нарушения оттока желчи и повышения содержания ГГТП в гепатоцитах. Регургитация желчи, поступление ее в кровоток, с одной стороны, освобождает ГГТП из мембран эпителия, выстилающего желчные пути, с другой — повышает активность фермента в крови.

Увеличение активности ГГТП всегда сопровождается внутри- и внепеченочной обтурацией желчных протоков, а также вторичным вовлечением печени в онкологические процессы организма путем метастазирования.

Желтуха всегда сопровождается увеличением активности ГГТП. Высокая активность фермента связана с нарушением проходимости желчных протоков, менее высокая соответствует острому гепатоцеллюлярному поражению.


При остром вирусном гепатите многократное исследование активности ГГТП позволяет следить за течением болезни, постоянное повышение активности ГГТП свидетельствует о развитии хронической формы заболевания.

Исследование активности ГГТП применяется для выявления лиц, принимающих алкоголь, при контроле над хроническими алкоголиками в процессе их лечения.

Принцип метода
γ-глутамилтрансфераза (ГГТ, γ-ГТФ) переносит глутамиловый остаток с γ-L-(+)глутамил-4-нитроанилина на дипептидный акцептор, которым является глицилглицин, служащий одновременно и буфером. Концентрацию освобожденного 4-нитроанилина измеряют фотометрически, после остановки ферментативной реакции подкислением.

Пределы активности:

- мужчины — 11—49 Ед/л ґ 0,017 или 0,19—0,83 мккат/л;

- женщины — 7—32 Ед/л ґ 0,017 или 0,12—0,54 мккат/л.

Необходимые реактивы

1. L-γ-глутамил-n-нитроанилид.

2. Натрия хлорид.

3. Глицилглицин, 0,55 моль/л, рН 8,3: 3,63 г глицилглицина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доливают до метки водой и растворяют (буферный раствор).

4. Субстратно-буферный раствор: в пробирку наливают 10 мл воды, добавляют 0,028 г L-γ-глутамил-n-нитроанилида и 0,082 г хлорида натрия и, не переставая мешать, растворяют содержимое пробирки на кипящей водяной бане в течение 60 сек. Затем раствор охлаждают до температуры 37 °С и добавляют 2,5 мл буферного раствора. Приготовленный раствор субстрата во время работы хранят в водяной бане при 37 °С.


Неиспользованный раствор субстрата можно хранить в холодильнике в течение недели. Субстрат плохо растворим, и при комнатной температуре выпадает в осадок. Поэтому перед употреблением выкристаллизовавшийся субстрат растворяют нагреванием в кипящей водяной бане. Нагревание и растворение субстрата можно повторить не более 2 раз.

5. Уксусная кислота ледяная, раствор 100 г/л: 10 мл кислоты доводят водой до 100 мл.

6. Основной калибровочный раствор n-нитроанилина: 0,0829 г n-нитроанилина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки водой и растворяют. Для определения активности γ-ГТФ можно пользоваться набором реактивов “Лахема”.

Ход определения
Опытная проба: в пробирку вносят 0,5 мл раствора субстрата и помещают в водяную баню при температуре 37 °С, приливают 0,05 мл сыворотки крови; содержимое перемешивают и инкубируют точно 15 мин при температуре 37 °С. Затем прибавляют 3 мл раствора уксусной кислоты и перемешивают. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но сыворотку добавляют после инкубации. Измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм или на ФЭК при длине волны 400—500 нм (фиолетовый или синий светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 1 см против холостой пробы. Окраска стабильна в течение нескольких часов.

Расчет активности производят по калибровочной кривой. Построение калибровочной кривой: из основного калибровочного раствора готовят рабочие растворы, как указано ниже.

В каждую из 6 пробирок наливают по 0,05 мл рабочих калибровочных растворов № 1—6, прибавляют по 3,5 мл раствора уксусной кислоты, перемешивают и измеряют экстинкцию против раствора уксусной кислоты при тех же условиях, что и опытную пробу.


По полученным значениям экстинкции строят калибровочную кривую. Линейность калибровочного графика сохраняется до активности 5000 нмоль/(с•л).

Клинико-диагностическое значение
Значительное повышение активности ГГТП имеет место при обструктивных поражениях печени, внепеченочной обтурации желчных протоков. Повышение активности возникает при таких заболеваниях печени, как цирроз, гепатит, при инфекционном мононуклеозе, пересадке почки, гипертироидизме, сахарном диабете, панкреатите, алкоголизме, при раке поджелудочной железы, раке предстательной железы, гепатоме.


Оцените статью: (11 голосов)
4.45 5 11
2007-2017 © Copyright ООО «МЕДКАРТА». Все права на материалы, находящиеся на сайте medkarta.com,
охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе, об авторском праве и смежных правах.